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第一章　核酸的分离与纯化1

第一节 真核基因组DNA的分离纯化1

实验1 蛋白酶K－苯酚抽提法3

【附】甲酰胺解聚联合透析法5

实验2　外周血白细胞DNA的提取（NaI法）6

实验3 小样本中基因组DNA的分离7

第二节 质粒DNA的分离纯化9

实验4　裂解法提取质粒DNA10

实验5 聚乙二醇沉淀法纯化质粒DNA13

第三节 真核细胞RNA的制备15

实验6　异硫氰酸胍－酚－氯仿一步（AGPC）法制备总RNA17

实验7　氯化锂－尿素法制备总RNA19

实验8 Trizol专用试剂分离RNA21

实验9　磁珠分离mRNA22

第二节 PCR反应体系的组成25

第一节 PCR原理25

第二章　聚合酶链反应25

实验10　大肠杆菌的PCR检测26

实验11 β－肌动蛋白（β-Actin）的RT-PCR检测28

实验12 乙型肝炎病毒（HBV）实时荧光定量PCR29

第三章　核酸的鉴定与分析33

第一节 分光光度法测定核酸的浓度和纯度33

实验13 紫外分光光度法检测核酸的浓度及纯度33

实验14 荧光分光光度法检测核酸浓度34

第二节 核酸凝胶电泳法36

实验15　DNA的琼脂糖凝胶电泳39

实验16　RNA的甲醛变性凝胶电泳41

实验17　非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳44

实验18　变性聚丙烯酰胺凝胶电泳47

第三节 核酸杂交技术50

实验19　Southern印迹50

【附1】核酸探针标记的方法56

【附2】杂交反应的条件及参数的优化62

实验20　Northern印迹63

【附3】RNA变性电泳方法65

实验21　斑点及狭缝印迹法67

实验22　组织细胞内mRNA的原位杂交70

第四节 DNA测序技术74

实验23 Sanger双脱氧核苷酸末端终止法74

【附1】Maxam-Gilbert化学降解法测定DNA序列79

【附2】DNA序列的自动化测定82

第四章　基因工程——综合性试验86

实验24　DNA的限制性酶切反应87

实验25　DNA片段的回收90

【附1】SYBR？Green Ⅰ核酸荧光染料——快速而灵敏的核酸检测试剂92

实验26　DNA的重组连接93

【附2】可以提高连接效率的化学试剂95

实验27　感受态细胞的制备（CaCl2法）与转化96

实验28　重组质粒的筛选与鉴定98

实验29　外源基因的诱导表达与检测102

第五章　其他相关的分子诊断技术109

实验30　PCR－限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）110

实验31　PCR－单链构象多态性分析（PCR-SSCP）113

实验32　蛋白质印迹技术116

实验33 等位基因特异的寡核苷酸120

（PCR-ASO）120

实验34　甲基化特异性基因扩增122

实验35　基因芯片126

【附】分子生物学实验设计与流程131

参考文献134

附录一　核酸和蛋白质数据135

附录二　常用仪器介绍140

附录三 常用试剂、缓冲液的配制147

附录四 分子生物学中常用技术153

附录五 常用词汇的中英文对照157