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第一部分 基因克隆和DNA分析的基本原理1

第1章 为什么说基因克隆与DNA分析非常重要3

1.1 遗传学的早期发展3

1.2 基因克隆和聚合酶链反应（PCR）的出现3

1.3　什么是基因克隆4

1.4　什么是PCR5

1.5 为什么基因克隆和PCR如此重要7

1.6　如何使用这本书10

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第2章　基因克隆的载体——质粒和噬菌体12

2.1 质粒12

2.2 噬菌体16

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第3章　从活细胞中纯化DNA25

3.1 全细胞DNA的制备25

3.2　质粒DNA的制备36

3.3　噬菌体DNA的制备41

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第4章　DNA纯化后的利用48

4.1　DNA操作酶的范围48

4.2　切割DNA的酶——限制性内切酶54

4.3　连接——将DNA分子连接到一起68

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第5章　将DNA引入活细胞76

5.1 转化——使细菌细胞获取DNA78

5.2　重组体的鉴定81

5.3 将噬菌体DNA引入细菌细胞85

5.4 重组噬菌体的鉴别88

5.5 将DNA引入非细菌细胞90

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第6章　大肠杆菌的克隆载体93

6.1 基于大肠杆菌质粒的克隆载体93

6.2　基于M13噬菌体的克隆载体99

6.3　基于λ噬菌体的克隆载体105

6.4　λ载体和其他高容量的载体使基因组文库得以建立112

6.5　其他细菌的克隆载体113

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第7章　真核生物的克隆载体114

7.1 酵母和其他真菌的载体114

7.2 高等植物的克隆载体120

7.3　动物的克隆载体129

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第8章　怎样获得特定基因的克隆134

8.1 筛选的难题134

8.2　直接筛选目的基因136

8.3 从基因文库中鉴定克隆138

8.4　鉴定克隆的方法142

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第9章　聚合酶链反应（PCR）154

9.1 PCR简介154

9.2　PCR的更多细节156

9.3 Taq聚合酶的错误率问题164

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第二部分 基因克隆和DNA分析在研究中的应用167

第10章　基因的位置和结构的研究169

10.1 如何定位一个基因169

10.2 DNA测序——预测基因的结构175

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第11章　基因表达和功能的研究186

11.1 克隆基因转录的研究186

11.2　基因表达调控的研究195

11.3　鉴定和研究克隆基因的翻译产物202

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第12章　基因组研究214

12.1 基因组学——怎样进行基因组测序214

12.2　后基因组学——试着理解基因组的序列224

12.3 转录物组和蛋白质组的研究228

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第三部分 基因克隆和DNA分析在生物技术中的应用233

第13章　克隆基因的表达235

13.1 在大肠杆菌中的外源基因表达载体237

13.2　在大肠杆菌中表达重组蛋白存在的问题245

13.3 真核细胞中重组蛋白的表达247

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第14章　基因克隆和DNA分析在医学中的应用254

14.1 重组药物的生产254

14.2　人类疾病相关基因的识别和鉴定263

14.3　基因治疗267

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第15章　基因克隆和DNA分析在农业中的应用271

15.1 植物基因工程中的基因添加271

15.2　基因消减280

15.3 转基因植物的问题284

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第16章　基因克隆和DNA分析在法医学和考古学中的应用289

16.1 利用DNA分析鉴定犯罪嫌疑人289

16.2 利用DNA指纹图谱分析血缘关系292

16.3 通过DNA分析进行性别鉴定295

16.4 古遗传学——利用DNA研究人类进化297

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术语表302

索引315