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目录1

实验室规则1

生物化学实验室规则1

实验室安全及防护2

生物化学实验基本操作4

第一篇　生物化学与分子生物学技术7

第一章　分光光度技术7

第一节　基本原理7

第二节　仪器的结构9

第三节　常见分光光度计9

第二章　层析技术12

第一节　吸附层析13

第二节　离子交换层析14

第三节　凝胶层析17

第四节　亲和层析22

第三章　电泳技术24

第一节　电泳的基本原理24

第二节　醋酸纤维素薄膜电泳26

第三节　琼脂糖凝胶电泳27

第四节　聚丙烯酰胺凝胶电泳28

第五节　SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳31

第六节　等电聚焦电泳32

第七节　二维聚丙烯酰胺凝胶电泳32

第一节　基本原理34

第四章　离心技术34

第二节　离心机的主要构造和类型35

第三节　制备性超速离心的分离方法38

第五章　分子生物学技术41

第一节 DNA体外重组技术41

第二节　PCR扩增技术48

第三节　核酸分子杂交52

第二篇 生物化学与分子生物学实验58

第六章 蛋白质定量测定实验58

实验1　双缩脲法测定蛋白质含量59

实验2　Folin-酚测定蛋白质含量59

实验4　紫外分光光度法测定蛋白质含量61

实验3　考马斯亮兰法测定蛋白质含量61

第七章　层析技术实验64

实验5　血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定64

实验6　葡聚糖凝胶分离蓝葡聚糖和溴酚蓝66

实验7　葡聚糖凝胶分离血红蛋白和二硝基氟苯（DNP）-胰糜蛋白酶混合液67

实验8　离子交换层析分离混合氨基酸68

第八章　电泳实验70

实验9　血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳70

实验10　血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳72

实验11 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清乳酸脱氢酶同工酶73

实验12 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定蛋白质相对分子质量75

实验13　等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点78

实验14　单向定量免疫电泳（火箭电泳）80

实验15　影响酶活性的因素82

第九章　酶学实验82

实验16　蔗糖酶的专一性83

实验17　pH值对酶促反应速度的影响85

实验18　温度对酶促反应速度的影响88

实验19　底物浓度对酶促反应速度的影响——碱性磷酸酶米氏常数的测定89

实验20　抑制剂对酶促反应速度的影响91

实验21　酶的提取及比活性测定93

第十章　物质代谢实验99

实验22　胰岛素对血糖含量的影响99

实验23　邻甲苯胺法测血糖含量100

实验24　糖酵解中间产物的鉴定101

实验25　血清中丙氨酸转氨酶（ALT）活性的测定103

实验26　血清脂类薄层层析104

实验27　血清总胆固醇酶法测定105

实验28　血清三酰甘油含量测定106

实验29　血清高密度脂蛋白酶法测定107

实验30　血清过氧化脂质（LPO）含量测定108

第十一章　核酸实验110

实验31 核糖核酸的提取110

实验32　核糖核酸的测定111

实验33　脱氧核糖核酸提取111

实验34　脱氧核糖核酸的测定112

第十二章　分子生物学实验114

实验35　真核细胞DNA的制备与定量114

实验36　真核细胞总RNA的提取与鉴定115

实验37　大肠杆菌感受细胞的制备及转化117

实验38 质粒DNA的提取118

实验39　DNA的限制性酶切反应120

实验40 目的DNA片段的回收121

实验41　DNA重组实验122

实验42 DNA琼脂糖凝胶电泳123

实验43 PCR基因扩增124

实验44　Southern杂交分析127

实验45　Northern杂交分析131

实验46　Western免疫印迹133

第三篇　研究性实验136

实验47　RT-RCR136

实验48　亲和层析纯化胰蛋白酶137

实验49　重组蛋白质包涵体的复性138

第四篇　相关技术140

一、盐析法140

二、膜分离技术140

三、细胞培养技术141

四、酵母双杂交技术142

附录144

一、硫酸铵饱和度的常用表144

二、实验室常用酸碱比重和浓度146

三、缓冲液的配制146

四、离心机转速与离心力的换算151

五、常用蛋白质分子质量标准参照物152

六、常用核酸蛋白质常数152

七、部分仪器的使用及注意事项153