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第一章　绪论1

目录1

1.1　生物大分子液相色谱分离和制备的发展方向2

1.2　分离介质的发展3

1.3　分离模式的考虑5

1.3.1　体积排阻色谱5

1.3.2　离子交换色谱6

1.3.3　反相色谱7

1.3.4　疏水作用色谱7

1.4　分离规模的扩大8

1.3.5　亲合色谱8

第二章　高效液相制备色谱的分离设计12

2.1　制备色谱分离的一般考虑13

2.1.1　制备色谱运行的模式14

2.1.2　切割收集技术14

2.1.3　微量组分的制备16

2.1.4　实验条件的一般选择17

2.2　制备色谱模型的讨论18

2.3　实验条件的选择与产量20

2.3.1　柱体积与填料20

2.3.2　流动相的选择24

2.3.3　样品的溶解度26

2.3.4　样品量28

2.3.5　样品纯度的确定29

2.3.6　最佳制备量29

2.4　制备色谱仪31

2.4.1　泵系统32

2.4.2　检测系统32

2.4.3　进样系统33

2.4.4　样品的收集34

3.1.1　在分析柱上的制备35

3.1.2　小规模的制备35

3.1　制备规模35

第三章　制备柱及相关技术35

3.1.3　大规模的制备36

3.2　制备柱的装填技术36

3.3　径向流动色谱38

3.3.1　径向流动色谱设计的原理39

3.3.2　径向流动和轴向流动的比较39

3.4　柱容量及其影响因素40

3.5　制备所得生物大分子纯度的评价44

4.1　顶替色谱的原理46

第四章　顶替色谱46

4.2.1　操作线47

4.2　顶替色谱的特性47

4.2.2　溶质的流速48

4.2.3　总效率49

4.3　顶替色谱实验条件51

4.3.1　顶替剂及其选择51

4.3.2　流动相的选择及影响52

4.3.3　填料及其影响53

4.3.4　柱直径及其影响54

4.4.1　实验设计55

4.4　溶质-溶质顶替色谱55

4.4.2　操作参数56

4.4.3　多次顶替59

第五章　体积排阻色谱61

5.1　体积排阻色谱理论61

5.1.1　保留模型61

5.1.2　保留机理62

5.2　体积排阻色谱理论模型64

5.2.1　硬球体溶质模型64

5.2.4　任意弯曲溶质模型65

5.2.3　任意平面孔模型-刚性溶质65

5.2.2　刚性分子溶质模型65

5.3　体积排阻色谱填料66

5.3.1　有机填料66

5.3.2　无机填料66

5.3.3　适合生物大分子分离的填料68

5.4　体积排阻色谱参数的讨论68

5.4.1　峰容量68

5.4.2　聚合物在体积排阻色谱上的分离69

5.4.3　分子量的准确测定70

5.5　体积排阻色谱操作条件71

5.5.1　填料72

5.5.2　柱长72

5.5.3　洗脱液72

5.5.4　流速73

5.5.5　样品容量74

5.5.6　蛋白质在变性洗脱条件下的分离74

5.6　蛋白质在体积排阻色谱上的保留行为75

5.6.1　蛋白质的分离76

5.6.2　蛋白质的分子量与容量因子（k′）76

5.6.4　pH不同时的分配系数与离子强度77

5.6.3　分配系数（Kd）77

5.6.5　在一定pH条件下蛋白质的分离度和离子强度78

5.6.6　离子强度恒定时pH对分配系数的影响79

第六章　离子交换色谱82

6.1　填料82

6.1.1　有机树脂填料83

6.1.2　无机-有机复合填料84

6.1.3　表面改性的无机填料及合成方法84

6.2　参数讨论87

6.2.1　孔径的影响87

6.2.2　柱长的影响88

6.2.3　流速的影响89

6.2.4　pH的影响89

6.2.5　离子强度的影响93

6.3　保留模型94

6.4　离子交换色谱分离和纯化蛋白质96

6.4.1 大豆中混合蛋白质的分离和纯化97

6.4.2　细胞色素C553的分离和纯化99

6.4.3　β-半乳糖苷酶和磷酸酶的分离和纯化99

6.4.4 牛血清蛋白（OVA）和大豆蛋白（STI）混合物的纯化102

7.1　溶质保留机理104

第七章　反相液相色谱104

7.2　填料及一般合成方法106

7.2.1　填料概述106

7.2.2　填料合成的一般方法108

7.3　分离和制备色谱的选择110

7.3.1　柱容量与分离度110

7.3.2　色谱柱的柱效率与蛋白质的分离度112

7.3.3　流动相的选择112

7.3.4　柱温的影响113

7.3.5　流速的影响116

7.4.1　上柱量与回收率的关系117

7.4　蛋白质在柱上的回收率117

7.4.2　洗脱系统与回收率的关系119

第八章　高效疏水作用色谱121

8.1　高效疏水作用色谱的原理121

8.2　高效疏水作用色谱填料123

8.2.1 基质124

10.1.3　甲醇含量的变化对容量因子k′的影响175

10.1.4　核苷和核苷酸分离175

10.2　单克隆抗体的分离和纯化181

10.2.1　分析分离系统182

10.2.2　分离纯化系统184

10.2.3　腹水和组织培养中单克隆抗体的分离和纯化186

10.3　人体血清中脱脂蛋白质的分离和纯化187

10.3.1　样品的制备188

10.3.2　色谱分离纯化系统188

10.4　α-淀粉酶的分离和纯化190

10.4.1　样品的制备190

10.4.2　酶活性测定190

10.4.3　分离纯化190

10.5　大豆蛋白在反相色谱上的分离和纯化191

10.4.4　酶活性与酶进样的关系191

10.5.1　混合蛋白的提取192

10.5.2　实验方法的设计192

10.5.3　实验条件192

10.5.4　细胞色素C的纯化193

10.5.5　大豆蛋白有效成分的分离和纯化193

第十一章　生物样品的制备196

11.1　材料选择及预处理196

11.2　细胞的破碎197

11.2.1　物理法197

11.3　提取198

11.2.3　化学处理法198

11.2.2　生物化学法198

11.3.1　蛋白质和酶的提取199

11.3.2　核酸的提取201

11.4　蛋白质和酶的初步提纯202

11.4.1　核酸沉淀法203

11.4.2　蛋白质沉淀法203

11.4.3　改变pH值203

11.4.4　选择变性法203

11.4.5　盐析法203

11.5　核酸的水解204

附录 国外常用的适于生物大分子分离分析的206

高效液相色谱填料206

表1　高效体积排阻色谱（SEC）填料206

表2　反相色谱（RPC）填料（大孔）208

表3　疏水作用色谱（HIC）填料211

表4　离子交换色谱（IEC）填料212

表5　亲合色谱（AFC）填料216

1．亲合色谱常用的底物（基体）216

2．一些代表性的亲合色谱填料举例217

索引218