现代细胞生物学技术【2025|PDF|Epub|mobi|kindle电子书版本百度云盘下载】

现代细胞生物学技术PDF格式电子书版下载

注意：本站所有压缩包均有解压码： 点击下载压缩包解压工具

前言1

第1章 研究显微镜与显微图像分析技术1

1.1 普通光学显微镜的构造和使用1

1.2 倒置相差显微镜的原理及使用6

1.3 荧光显微镜的原理及使用7

1.4 激光扫描共聚焦显微镜技术11

1.5 显微操作技术17

1.5.1 体细胞显微注射技术18

1.5.2 受精卵显微注射技术20

1.6 活细胞荧光显微成像技术26

1.7 细胞显微图像分析技术29

第2章 电镜技术35

2.1 透射电镜35

2.2 TEM样品制备技术38

2.2.1 TEM超薄切片技术38

2.2.2 TEM负染色技术44

2.2.3 TEM细胞化学技术46

2.2.4 石蜡组织与石蜡切片的TEM样品制备63

2.3 扫描电子显微镜64

2.4 SEM样品制备66

2.4.1 常规SEM生物样品制备66

2.4.2 SEM游离细胞制备68

2.4.3 SEM免疫细胞化学技术71

第3章 细胞化学技术74

3.1 普通细胞化学74

3.1.1 细胞化学理论知识74

3.1.2 PAS（periodic acid Schiff reaction）法显示糖原77

3.1.3 苏丹染色法显示脂类80

3.1.4 酸性蛋白与碱性蛋白的显示81

3.1.5 细胞骨架微丝蛋白的显示82

3.1.6 Feulgen法显示核酸84

3.1.7 甲基绿-派洛咛法显示核酸85

3.1.8 Giemsa染色法显示染色质/体86

3.1.9 苏木精-伊红染色显示细胞核和细胞质87

3.2 酶细胞化学89

3.2.1 酶细胞化学的基本理论89

3.2.2 碱性磷酸酶显示91

3.2.3 金属沉淀法显示酸性磷酸酶93

3.2.4 联苯胺法显示过氧化物酶95

3.2.5 通过琥珀酸脱氢酶活性进行MTT法检测细胞相对存活率95

3.3 免疫细胞化学97

用ABC方法来鉴定体外培养的小鼠星形胶质细胞98

3.4 荧光细胞化学与免疫荧光细胞化学100

3.4.1 吖啶橙荧光染色法103

3.4.2 间接免疫荧光细胞化学法显示细胞中的微管蛋白105

3.4.3 用双重免疫荧光标记法鉴定体外培养的小鼠神经元和神经胶质细胞106

3.4.4 用双重免疫荧光法鉴定组织切片中的两种细胞的方法108

第4章 细胞培养技术111

4.1 细胞培养的基本原理与技术111

4.1.1 细胞在体外生长的条件111

4.1.2 培养细胞常用设备和用品113

4.1.3 培养用品的清洗116

4.1.4 培养用品的灭菌与消毒118

4.1.5 无菌操作的基本要领和要求119

4.1.6 细胞培养用液120

4.2 细胞培养的方法126

4.2.1 原代细胞培养126

4.2.2 细胞传代培养129

4.3 体外培养细胞的观察方法131

4.3.1 培养细胞的生长特征与形态分型131

4.3.2 培养细胞固定、染色观察的一般标本制备135

4.3.3 细胞计数方法137

4.3.4 细胞的显微测量138

4.4 培养细胞的冻存、复苏与运输140

4.5 培养细胞增殖动力学方法142

4.5.1 生长曲线的测定142

4.5.2 分裂指数测定143

4.5.3 克隆（集落）形成试验144

4.5.4 BrdU掺入法测定细胞增殖指数145

4.6 肿瘤细胞黏附和侵袭能力的体外检测方法147

4.6.1 肿瘤细胞的黏附能力分析实验148

4.6.2 细胞侵袭重建基底膜实验149

4.6.3 肿瘤细胞迁移实验151

4.7 哺乳动物正常组织细胞的体外培养与应用153

4.7.1 胎鼠大脑皮层神经细胞的原代培养方法153

4.7.2 含药血清对体外培养细胞的药理实验155

4.7.3 四氯化碳致肝细胞损伤及SOD活性检测158

第5章 培养细胞凋亡检测技术162

5.1 光学显微镜形态学检测162

5.1.1 台盼蓝染色法显示凋亡细胞164

5.1.2 苏木精-伊红染色（HE染色）显示凋亡细胞164

5.1.3 Giemsa染色法显示凋亡细胞166

5.1.4 吖啶橙荧光染色显示凋亡细胞167

5.1.5 Ho.33342与PI荧光双染显示凋亡与坏死细胞168

5.2 凋亡细胞的超微结构观察169

5.2.1 透射电镜观察凋亡细胞169

5.2.2 扫描电镜观察凋亡细胞170

5.3 凋亡细胞琥珀酸脱氢酶活性检测（MTT法）171

5.4 DNA电泳检测凋亡梯状带172

5.5 细胞膜磷脂酰丝氨酸荧光显示173

5.6 凋亡细胞原位末端标记174

第6章 细胞工程178

6.1 细胞融合178

6.1.1 聚乙二醇介导的细胞融合178

6.1.2 细胞电融合181

6.1.3 早熟染色体凝集的诱导和观察184

6.2 细胞的分离187

6.2.1 淋巴细胞的分离纯化187

6.2.2 死活细胞的分离188

6.3 细胞器的分离189

第7章 原位杂交技术192

7.1 地高辛标记的原位杂交193

7.2 放射性同位素标记的原位杂交196

7.3 胚胎整体原位杂交198

第8章 细胞化学成分的分离与测定206

8.1 蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳206

8.2 真核细胞基因组DNA的提取207

8.3 真核细胞RNA的提取209

8.4 免疫沉淀法分离并定量分析目的蛋白质211

8.5 蛋白质免疫印迹法213

8.6 蛋白质双向电泳分析细胞和组织中的蛋白质群215

第9章 真核细胞基因转染与表达技术224

9.1 DNA转染技术224

9.1.1 磷酸钙转染技术224

9.1.2 脂质体转染技术226

9.2 基因在细胞中表达的检测技术227

9.2.1 DNA印迹杂交法227

9.2.2 RNA印迹杂交法230

9.2.3 蛋白印迹杂交法233

9.2.4 绿色荧光蛋白基因转染及检测235

第10章 哺乳动物基因敲除技术237

10.1 常用基因打靶载体的设计原则237

10.1.1 P21（WAF1）基因打靶载体的构建237

10.1.2 C-Crk基因打靶载体的构建239

10.1.3 视黄醇脱氢酶RDH15基因打靶载体的构建241

10.2 胚胎干细胞基因敲除243

10.2.1 胚胎干细胞的增殖和维持243

10.2.2 胚胎干细胞标准电穿孔246

10.2.3 鉴定、筛选重组的胚胎干细胞247

10.3 嵌合体小鼠的制备248

10.3.1 嵌合体小鼠的产生249

10.3.2 GPI同工酶的水平淀粉凝胶电泳检测嵌合体小鼠252

10.4 基因敲除小鼠的建立253

10.4.1 提取鼠尾DNA用PCR来检测敲除基因253

第11章 干细胞和组织工程技术256

11.1 胚胎干细胞培养技术与方法256

11.1.1 小鼠胚胎干细胞的分离、培养及诱导分化256

11.1.2 人胚胎干细胞的分离和培养263

11.1.3 人类胚胎干细胞定向分化成神经细胞268

11.2 成体干细胞培养技术与方法272

11.2.1 成人骨髓基质干细胞培养、纯化及鉴定272

11.2.2 人造血干/祖细胞的体外培养与检测技术275

11.2.3 大鼠胚胎脑神经干细胞和祖细胞的分离培养283

11.3 神经组织工程287

第12章 流式细胞术294

12.1 流式细胞仪的结构、工作原理及应用294

12.2 流式细胞仪检测细胞膜受体（直标法）297

12.3 流式细胞仪同时检测细胞内和细胞外抗原298

12.4 流式细胞仪检测细胞凋亡（PI单染色法）299

12.5 流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死（PI和Annexin V-FITC双染色法）301

12.6 流式细胞仪检测凋亡细胞内游离钙离子浓度变化303