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1 第一章 基本技术1

1.1 蛋白质的测定1

1.1.1 紫外吸收法1

1.1.2 福林酚法3

1.1.3 染料结合法5

1.2 蛋白质的分离7

1.2.1 凝胶过滤7

1.2.2 离子交换层析13

1.2.3 羟基磷灰石22

1.2.4 高压液相层析23

1.3 蛋白质的透析和浓缩23

1.3.1 透析24

1.3.2 浓缩25

1.4 放射活性的测量26

1.5 放射自显影29

1.5.1 直接放射自显影30

1.5.2 荧光显影32

1.5.3 胶片的预曝光34

1.5.4 放射性记号笔35

2 第二章 抗体的制备37

2.1 引言37

2.2 普通抗体的制备37

2.2.1 免疫方案38

2.2.2 放血41

2.2.3 血清分离41

2.2.4 由血浆分离血清42

2.3 单克隆抗体43

2.3.1 细胞融合和分泌抗体的杂交瘤的选择44

2.3.2 杂交瘤的克隆化49

2.3.3 腹水的制备52

2.3.4 体外单克隆抗体的制备54

2.3.5 单克隆抗体的类型和亚型的测定54

2.3.6 用病毒转化人B淋巴细胞以产生单克隆抗体56

3 第三章 免疫球蛋白及其片段的分离60

3.1 前言60

3.2 免疫球蛋白的处理与保存61

3.3 IgG的分离63

3.3.1 从血清中分离IgG64

3.3.2 从鸡蛋中分离IgG68

3.4 IgG片段的制备69

3.4.1 重链、轻链的分离73

3.4.2 Fab和Fc片段的制备75

3.4.3 F（ab′）2，Fab′和pFc′片段的制备78

3.4.4 Fd和VH片段的制备81

3.4.5 小白鼠与大白鼠单克隆IgG片段的制备81

3.5 IgM的分离84

3.6 IgM片段的制备88

3.6.1 重链、轻链和J链的分离88

3.6.2 从IgM中分离J链：单体IgM的制备88

3.6.3 Fcu、F（ab′）2u和Fabu片段的制备91

3.6.4 小鼠单克隆IgM片段的分离93

3.7 IgA的分离94

3.7.1 血清IgA的分离94

3.7.2 乳汁或初乳中分泌性IgA的分离97

3.8 IgA片段的制备100

3.8.1 重链、轻链和J链的分离100

3.8.2 IgA J链的分离102

3.8.3 分泌型IgA结合态分泌成份的分离103

3.8.4 乳汁或初乳游离态分泌成份的分离103

3.8.5 F（ab′）2α、Fab′α和Fcα片段的制备104

3.8.6 Fdα的制备107

3.9 IgE的分离107

3.10 IgE片段的制备109

3.11 IgD的分离110

3.12 IgD片段的制备111

4 第四章 淋巴细胞的分离和组分分析112

4.1 淋巴细胞的处理和贮存112

4.1.1 计数淋巴细胞并确定其存活率116

4.1.2 戊二醛固定淋巴细胞119

4.1.3 细胞表面蛋白的清除和再生122

4.2 淋巴细胞的分离123

4.2.1 从血中分离淋巴细胞124

4.2.2 分离淋巴细胞、红细胞、血小板和血浆126

4.2.3 从实体组织中分离淋巴细胞128

4.2.4 溶解红细胞132

4.3 淋巴细胞组分分离133

4.3.1 富集T细胞133

4.3.2 富集B细胞135

4.3.3 特殊花环形成技术137

4.3.4 其他组分分析技术139

4.4 溶解细胞及细胞膜140

4.4.1 去污剂的选择140

4.4.2 溶解整个淋巴细胞的方法146

4.4.3 溶解已分离的细胞膜148

5 第五章 放射性标记技术150

5.1 前言150

5.1.1 放射性防护151

5.1.2 掺入蛋白质的放射活性检测152

5.2 放射性碘化反应153

5.2.1 氯胺T碘化反应156

5.2.2 Iodogen碘化反应161

5.2.3 乳过氧化物酶催化的碘化反应162

5.2.4 其它碘化反应技术165

5.3 放射性标记糖蛋白和糖脂166

5.3.1 高碘酸盐氧化反应166

5.3.2 半乳糖氧化酶氧化反应169

5.4 生物合成的标记171

5.4.1 蛋白质的生物合成标记172

5.4.2 磷酸蛋白和磷酸脂的生物合成标记173

6 第六章 琼脂和琼脂糖中的沉淀技术175

6.1 引言175

6.1.1 亲和力和亲和度175

6.2 琼脂和琼脂糖凝胶技术的基本内容176

6.2.1 在玻璃板上预复盖琼脂176

6.2.2 沉淀线的染色177

6.3 扩散技术178

6.3.1 双相免疫扩散178

6.3.2 单相免疫扩散法181

6.3.3 不溶性蛋白质的修饰183

6.4 电泳技术184

6.4.1 电渗184

6.4.2 对流免疫电泳185

6.4.3 免疫电泳187

6.4.4 火箭免疫电泳190

6.4.5 交叉免疫电泳191

6.4.6 交叉免疫电泳技术的改进194

7 第七章 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术195

7.1 聚丙烯酰胺凝胶的制备和操作195

7.1.1 蛋白质染色196

7.1.2 糖染色199

7.1.3 聚丙烯酰胺凝胶的储藏和干燥201

7.1.4 切割聚丙烯酰胺凝胶测定其放射活性谱204

7.1.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品浓缩205

7.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：基本原理207

7.2.1 PAGE装置210

7.3 变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳210

7.3.1 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳211

7.3.2 梯度SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳221

7.3.3 尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳223

7.3.4 变性条件下的盘状PAGE224

7.4 在非变性条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳226

7.5 聚丙烯酰胺凝胶的等电聚焦电泳226

7.5.1 引言226

7.5.2 在平板凝胶上的聚焦电泳227

7.5.3 在尿素或去垢剂存在时的等电聚焦电泳231

7.6 等电聚焦和SDS—聚丙烯酰胺凝胶双向电泳232

7.7 采用蛋白水解酶和SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白质的肽谱分析237

8 第八章 聚丙烯酰胺凝胶电泳所分离之抗原的特异性检测241

8.1 引言241

8.2 在聚丙烯酰胺凝胶电泳的基础上进行交叉免疫电泳242

8.3 抗体直接应用于聚丙烯酰胺凝胶245

8.4 将蛋白质从凝胶转移到多孔膜上（免疫印迹法）246

8.4.1 重氮化纸的制备247

8.4.2 扩散转移250

8.4.3 电泳转移251

8.4.4 从重氮化纸的印迹上除去抗体258

8.5 滤纸亲和转移法259

8.5.1 直接FAT259

8.5.2 夹心FAT261

9 第九章 制备凝胶技术263

9.1 分离沉淀的抗原抗体复合物263

9.1.1 制备双扩散263

9.1.2 用分离的沉淀物进行免疫264

9.1.3 用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对沉淀物进行分析265

9.2 分离纯化的蛋白质265

9.2.1 制备SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳266

9.2.2 制备等电聚焦电泳269

9.2.3 块状电泳271

10 第十章 亲和层析与免疫沉淀274

10.1 引言274

10.2 不溶性衍生物277

10.2.1 琼脂糖珠溴化氰偶联法279

10.2.2 金黄色葡萄球菌吸附剂的制备284

10.3 亲和层析分离法288

10.3.1 抗体的免疫吸附及其纯化290

10.3.2 IgG亚型的分离和小鼠IgG单克隆抗体的分离293

10.3.3 固相化的抗体296

10.3.4 固相化的凝集素299

10.3.5 固相硼酸308

10.3.6 细胞的亲和层析310

10.4 免疫沉淀314

10.4.1 使用金黄色葡萄球菌的免疫沉淀反应315

10.4.2 不与A蛋白结合的抗体的免疫沉淀319

11 第十一章 免疫分析技术324

11.1 固相放射结合免疫分析324

11.1.1 可溶性抗原的抗体检测325

11.1.2 检测细胞表面抗原的抗体329

11.2 竞争结合放射免疫分析330

11.2.1 竞争性放射免疫分析法的建立331

11.2.2 Farr型分析334

11.3 免疫放射度量分析（IRMA）341

11.4 酶联免疫吸附技术（ELISA）345

11.4.1 碱性磷酸酶和抗体的交联346

11.4.2 ELISA检测抗体347

12 第十二章 免疫细胞化学和免疫组织化学350

12.1 引言350

12.2 免疫荧光技术351

12.2.1 荧光显微镜352

12.2.2 流式显微荧光分析仪353

12.2.3 荧光染料与免疫球蛋白的结合356

12.2.4 悬浮液中完整细胞的标记359

12.2.5 固定细胞和组织切片的标记364

12.3 酶标记技术368

12.3.1 过氧化物酶与免疫球蛋白的偶联370

12.3.2 用过氧化物酶结合抗体进行标记371

12.3.3 过氧化物酶—抗过氧化物酶（PAP）标记375

12.3.4 用碱性磷酸酶结合抗体标记379

12.4 细胞的放射自显影383

12.5 电子显微镜390

附录392

1 缩写392

2 缓冲液392

3 产品制造商和供货商一览表395

参考文献403