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第一篇 核酸技术3

第一章 核酸制备3

第一节 真核生物基因组DNA的提取与纯化3

第二节 细菌基因组DNA的提取与纯化9

第三节 质粒DNA的提取与纯化13

第四节 酵母基因组DNA的提取21

第五节 λ噬菌体DNA的提取21

第六节 石蜡包埋组织DNA的提取23

第七节 总RNA的提取26

第八节 mRNA的提取31

第二章 核酸的检测34

第一节 核酸浓度和纯度的测定34

第二节 核酸的浓缩、沉淀、纯化与保存36

第三节 核酸电泳41

第四节 RNA的定量和完整性分析56

第三章 DNA序列测定58

第一节 同位素标记测序技术58

第二节 非同位素银染测序技术66

第四章 聚合酶链反应（PCR）71

第五章 核酸探针与核酸杂交技术80

第一节 概论80

第二节 核酸探针制备86

第三节 核酸分子杂交常规实验95

第六章 原位杂交技术99

第一节 原位杂交组织（或细胞）化学概述99

第二节 原位杂交组织（或细胞）化学技术106

第三节 荧光原位杂交技术（FISH）110

第七章 单链构象多态性分析（SSCP）检测基因突变113

第一节 基因突变的检测方法113

第二节 单链构象多态性分析（SSCP）117

第八章 限制片段长度多态性（RFLP）和随机扩增多态DNA（RAPD）技术121

第一节 RFLP技术121

第二节 RAPD技术123

第九章 基因突变及人工诱变技术125

第一节 基因突变125

第二节 DNA的定点诱变128

第十章 常用基因克隆技术137

第一节 cDNA的合成137

第二节 DNA限制性内切酶消化140

第三节 DNA片段的分离回收145

第四节 外源DNA片段和质粒载体的连接反应151

第五节 感受态细菌的制备和转化153

第六节 青核细胞的基因导入方法157

第七节 重组体阳性克隆的筛选167

第十一章 mRNA差别显示技术171

第十二章 细胞凋亡的分子生物学检测方法176

第十三章 RNAi的原理和方法178

第一节 siRNA的设计178

第二节 siRNA的制备179

第三节 siRNA的转染方法181

第四节 转染实验的注意事项181

第五节 RNAi的应用前景182

第二篇 蛋白质技术187

第一章 蛋白质的分离提取方法187

第一节 溶解法187

第二节 沉淀法193

第三节 超速离心法211

第四节 透析法214

第五节 超滤法217

第二章 蛋白质的纯化鉴定技术224

第一节 电泳法224

第二节 层析法267

第三节 蛋白质印迹307

第四节 蛋白质芯片320

第五节 质谱法324

第三章 蛋白质的含量测定335

第一节 凯氏定氮法335

第二节 双缩脲测定法337

第三节 Folin酚法（Lowry法）339

第四节 考马斯亮蓝法341

第五节 紫外分光测定法345

第六节 BCA蛋白质定量检测349

第四章 蛋白质结构的测定352

第一节 蛋白质一级结构的测定方法352

第二节 蛋白质三维结构研究方法363

第五章 蛋白质活性的测定368

第一节 DNA酶活性的测定方法368

第二节 蛋白酶活性的测定方法371

第三节 抗癌蛋白活性的检测374

第六章 酵母双杂交技术378

第一节 酵母双杂交技术的概况378

第二节 酵母双杂交的基本过程380

第三篇 生物信息学387

第一章 绪言387

第一节 生物信息学概述387

第二节 生物信息学服务内容388

第三节 重要的生物信息学网址和生物信息学服务器388

第二章 生物学数据库介绍390

第一节 GenBank（数据库）390

第二节 美国国家生物技术信息中心（NCBI）399

第三节 数据库的冗余与偏差408

第四节 向数据库发送序列数据及其他409

第三章 序列比对411

第一节 两个序列的比较：BLAST和FASTA412

第二节 查询序列与一个数据库来比较：BLAST和FASTA413

第三节 BLAST的详细步骤415

第四节 BLAST搜索的一些策略422

第五节 高级比对搜索：用BLAST来发现新基因423

第六节 多序列比对424

第四章 基因表达的生物信息学方法435

第一节 mRNA：基因表达的研究对象436

第二节 cDNA文库的基因表达分析436

第三节 基因表达系列分析440

第四节 微阵列：基因表达的全基因组测量442

第五章 蛋白质分析和蛋白质组学445

第一节 蛋白质结构预测445

第二节 蛋白质定位459

第三节 蛋白质功能预测460

第四节 蛋白质组学：对高通量蛋白质数据进行分析的生物信息学工具和方法462

第六章 基因组测定及分析469

第一节 DNA测序及序列片断的拼接469

第二节 基因区域的预测476

第三节 基因组的比较487

第四篇 细胞分子免疫学实验技术495

第一章 免疫电泳技术495

第一节 免疫电泳技术的基本概况495

第二节 免疫电泳操作程序498

第二章 基因工程抗体技术513

第一节 小分子抗体513

第二节 人—鼠嵌合抗体516

第三节 抗体库技术520

第四节 基因工程抗体的表达，纯化及活性测定527

第三章 噬菌体展示技术533

第一节 噬菌体展示技术基本原理533

第二节 噬菌体展示技术筛选多肽534

第三节 噬菌体肽库的应用541

第四章 HLA分型技术543

第一节 PCR-SSO HLA分型技术544

第二节 PCR-RPLP HLA分型技术549

第三节 PCR-SSP HLA分型技术553

第四节 常用HLA DNA分型技术的特点和选用557

第五章 T细胞克隆技术和HLA／抗原肽四聚体制备技术559

第一节 T细胞克隆技术559

第二节 HLA／抗原肽四聚体制备技术564

第三节 四聚体的制备及应用571

第六章 免疫学中的特殊PCR技术574

第一节 免疫PCR(IM—PCR)574

第二节 定量PCR577

第三节 原位PCR(In situ PCR)581

第四节 PCR技术在免疫学中的应用584

第七章 免疫亲和层析技术588

第一节 免疫亲和层析的基本过程588

第二节 免疫亲和层析的主要影响因素590

第三节 免疫亲和层析具体实施方案592

第八章 免疫标记技术602

第一节 细胞爬片、甩片或切片的制备602

第二节 免疫荧光标记技术603

第三节 放射性核素标记技术614