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第一篇 总论2

第一章 概述2

第一节 军团菌2

第二节 军团菌病内容与范畴2

一、军团菌病2

二、军团菌病分类3

第三节 军团菌病的危害3

第四节 军团菌病诊断标准4

一、诊断原则4

二、诊断标准4

第二章 我国军团菌病的现况与控制对策7

第一节 军团菌病变迁7

一、首次证明军团菌肺炎7

二、首次证明军团菌感染引起庞蒂亚克热7

三、军团菌病是一种新发现的疾病8

第二节 军团菌病的现状8

一、军团菌病国外流行概况8

二、军团菌病国内流行概况9

第三节 控制军团菌病的策略10

一、对传染源的措施10

二、切断传播途径12

三、保护易感人群12

第三章 军团菌病的流行病学14

第一节 军团菌病的传播与流行14

一、传染源16

二、传播途径16

三、人群易感性16

四、发病率与病死率17

五、季节分布17

六、地区分布17

七、军团菌病人群（年龄）分布特征18

八、流行病学分类18

九、流行因素19

十、流行形式19

第二节 军团菌病的流行病学调查20

一、总体原则20

二、调查对象20

三、调查内容和方法21

第四章 军团菌病流行病学与菌株分型方法23

第一节 军团菌病流行与菌株分型23

第二节 军团菌血清分型25

第三节 嗜肺军团菌分子分型26

一、脉冲场凝胶电泳分型27

二、多位点序列分型28

三、扩增片段长度多态性分型29

四、随机引物扩增多态性DNA分型30

五、嗜肺军团菌毒力岛分子分型31

六、核糖体基因分型31

第五章 军团菌病的预防34

第一节 群体预防34

一、自我防护34

二、健康教育34

第二节 公共环境水源军团菌监测34

一、公共环境水源军团菌监测的总体原则34

二、医院冷热水系统军团菌监测36

三、冷却塔军团菌监测39

第六章 军团菌的微生态学43

第一节 微生态的形成43

一、细菌的演变43

二、微生态的构成43

第二节 细胞内生命循环44

一、细胞内生命循环44

二、微生态失调45

第二篇 军团菌48

第七章 军团菌属48

第一节 军团菌的一般特征48

一、军团菌分类48

二、亚型分布与鉴定49

第二节 军团菌分类与命名49

一、军团菌属49

二、军团菌属分类命名49

第三节 嗜肺军团菌血清学分型54

第四节 嗜肺军团菌分子分型56

一、扩增片段长度多态性基因分型56

二、脉冲场凝胶电泳基因分型57

三、基因测序分型57

第八章 嗜肺军团菌60

第一节 嗜肺军团菌的生命周期、生长周期和发育周期60

一、前言60

二、嗜肺军团的生命周期61

三、嗜肺性军团菌生长周期64

四、嗜肺军团菌的发育周期65

五、结束语68

第二节 嗜肺军团菌基因组69

一、嗜肺军团菌基因组的一般特征69

二、嗜肺军团菌的泛基因组70

三、宿主—病原体相互作用——嗜肺军团菌基因组的独有特征71

四、由基因组序列推导出的代谢相关功能78

五、基因组中的调节和信号转导79

六、嗜肺军团菌的比较基因组学80

七、比较基因组学——军团菌、柯克斯体和其他胞内致病菌82

第三节 嗜肺军团菌的分泌系统83

一、分泌系统的概述83

二、嗜肺军团菌蛋白跨越细胞质膜（内膜）的途径85

三、嗜肺军团菌的分泌系统87

四、主要效应蛋白及其作用90

第四节 嗜肺军团菌毒力岛、毒力因子95

一、毒力岛基因结构及其致病性95

二、毒力因子基因结构及其致病性97

三、毒力岛与毒力因子致病机制99

第九章 其他常见致病性军团菌种104

第一节 博兹曼军团菌104

一、生物学特性104

二、致病性105

三、细菌培养与鉴定105

第二节 长滩军团菌106

一、生物学特性106

二、致病性106

三、细菌培养与鉴定108

第三节 菲氏军团菌108

一、生物学特性108

二、致病性109

三、细菌培养与鉴定109

第四节 海伦山军团菌110

一、生物学特性110

二、致病性111

三、细菌培养与鉴定111

第五节 杜氏军团菌112

一、生物学特性112

二、致病性113

三、细菌培养与鉴定113

第六节 麦氏军团菌114

一、生物学特性114

二、致病性115

三、细菌培养与鉴定116

第七节 约旦军团菌117

一、生物学特性117

二、致病性118

三、细菌培养与鉴定118

第八节 沃氏军团菌119

一、生物学特性119

二、致病性120

三、细菌培养与鉴定121

第九节 哈氏军团菌122

一、生物学特性122

二、致病性122

三、细菌培养与鉴定123

第十节 马氏军团菌124

一、生物学特性124

二、致病性124

三、细菌培养与鉴定125

第十一节 伯明翰军团菌126

一、生物学特性126

二、致病性126

三、细菌培养与鉴定127

第十二节 辛辛那提军团菌128

一、生物学特性128

二、致病性128

三、细菌培养与鉴定129

第十三节 戈氏军团菌130

一、生物学特性130

二、致病性131

三、细菌培养与鉴定131

第十四节 图森军团菌132

一、生物学特性133

二、致病性133

三、细菌培养与鉴定134

第十五节 茴芹军团菌135

一、生物学特性135

二、致病性135

三、细菌培养与鉴定136

第十六节 兰辛军团菌138

一、生物学特性138

二、致病性138

三、细菌培养与鉴定139

第十七节 红荧光军团菌140

一、生物学特性140

二、致病性141

三、细菌培养与鉴定141

第十八节 巴黎军团菌142

一、生物学特性142

二、致病性143

三、细菌培养与鉴定143

第十九节 橡树岭军团菌144

一、生物学特性145

二、致病性145

三、细菌培养与鉴定146

第二十节 圣灵军团菌147

一、生物学特性147

二、致病性147

三、细菌培养与鉴定148

第二十一节 昆氏军团菌149

一、生物学特性149

二、致病性149

三、细菌培养与鉴定150

第二十二节 吉斯特军团菌151

一、生物学特性151

二、致病性151

三、细菌培养与鉴定152

第三篇 军团菌病158

第十章 军团菌病的临床158

第一节 军团菌病的临床特点158

一、军团菌肺炎临床表现159

二、临床特征160

三、军团菌病的病原体160

四、易感因素161

第二节 军团菌病的治疗162

一、治疗原则——军团菌诊断标准及处理原则WS195—2001162

二、治疗策略163

三、治疗方案164

四、其他165

第三节 军团菌病的实验室诊断方法166

一、实验室检查166

二、诊断和鉴别诊断171

第四节 军团菌病的影像学诊断173

第五节 医院和社区获得性军团菌肺炎——同一疾病的2个方面177

第六节 军团菌病死亡的危险因素178

第七节 军团菌病潜伏期、发病期和初期的症状179

第八节 用左氟沙星和阿奇霉素成功治疗重症军团菌病180

第九节 各种抗生素体外抗军团菌活性181

一、抗生素体外抗军团菌活性181

二、相关文献报道183

第十节 体内抗嗜肺军团菌活性研究185

一、细胞内抗嗜肺军团菌药物有效浓度测定185

二、大环内酯类和氟喹诺酮类药物对细胞内嗜肺军团菌的作用187

三、其他188

第十一节 并发症和预后189

一、并发症189

二、预后189

第十二节 嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌社区获得性肺炎的临床对比分析189

第十一章 军团菌病的诊断194

第一节 PCR法诊断军团菌病194

一、引物设计和合成194

二、试验方法195

三、应用197

第二节 实时PCR结合微量凝集试验早期诊断军团菌感染202

第三节 反向斑点杂交法快速检测嗜肺军团菌203

第四节 酶标法和荧光定量PCR检测儿童下呼吸道嗜肺军团菌感染204

第五节 环介导等温扩增法检测军团菌205

一、方法简介205

二、应用205

第六节 各方法的实际应用209

第十二章 军团菌病的临床流行病学212

第一节 军团菌病血清流行病学调查与现场杀菌的初步观察212

第二节 嗜肺军团菌与非嗜肺军团菌所致社区获得性肺炎的临床对比分析214

第三节 长滩军团菌引起的感染216

第四节 旅行相关军团菌病217

第五节 新生儿军团菌病221

一、国外流行情况222

二、国内流行情况222

第六节 老年军团菌肺炎的相关危险因素分析223

第七节 重症军团菌肺炎病例分析225

一、12例重症军团菌肺炎回顾性分析225

二、重症军团菌肺炎16例临床分析227

第八节 军团菌分子分型方法在流行病学调查中的应用228

一、脂肪酸分型228

二、核糖体基因分型法229

三、基于电泳的分子指纹图谱技术229

四、直接测序分型技术（SBT）230

第九节 MLVA方法在军团菌分子分型中的应用评价231

第十节 扩增片段长度多态性分析在军团菌分型中的应用232

第十一节 中国分离嗜肺军团菌株脉冲场凝胶电泳分型及其数据库的建立234

第十二节 嗜肺军团菌血清1型菌株流行情况238

一、嗜肺军团菌血清1型及分子分型研究238

二、LP1菌株随机扩增多态性DNA指纹图谱研究239

三、我国九省（市、区）82株嗜肺军团菌血清1型菌株的序列分型239

四、嗜肺军团菌血清1型环境分离株的脂肪酸成分分析及其应用241

第十三节 中欧军团菌病流行情况242

第十四节 西班牙军团菌流行情况243

第十五节 日本军团菌病流行情况247

第十六节 韩国军团菌的分布250

一、军团菌的血清学分布情况251

二、军团菌地理分布分析251

三、军团菌种属与设施类型251

第十七节 新加坡环境监测和分子分型研究253

第十八节 美国及其他国家军团菌病流行情况253

一、美国253

二、其他国家254

第十九节 国内军团菌病流行情况254

一、暴发流行254

二、抗体水平研究256

第二十节 澳门地区公共场所军团菌的检出和脂肪酸分型研究257

一、采样和军团菌的检测258

二、结果260

三、讨论264

第二十一节 在患者和环境水中军团菌基因型的分布和相关性266

第二十二节 军团菌活菌检测268

第二十三节 军团菌病的暴发、监测和预防271

一、LD的暴发271

二、LD监测272

三、流行病学研究272

四、预防273

第十三章 军团菌病与机体免疫278

第一节 先天性免疫与获得性免疫278

一、引言278

二、军团菌免疫原278

三、嗜肺军团菌的固有免疫反应279

四、嗜肺军团菌感染的适应性免疫280

五、军团菌感染的获得性免疫反应281

六、军团菌抗原的加工和提呈281

七、免疫机制282

八、结论285

第二节 军团菌的先天免疫286

一、Toll样受体在军团菌免疫中的作用288

二、军团菌感染后产生的细胞因子289

三、活化的巨噬细胞限制军团菌生长290

四、未来研究方向291

第三节 军团菌的先天免疫和Toll样受体291

一、简介292

二、军团菌结构292

三、结论295

第四节 抗军团菌的免疫活化295

一、前言295

二、天然抗原的免疫刺激296

三、儿茶素的抗菌与抗病毒效应296

四、天然产物对细胞因子的调节297

五、军团菌感染后儿茶素在树突状细胞产生细胞因子方面的作用297

六、军团菌感染后儿茶素在树突状细胞产生共刺激分子方面的作用297

第四篇 军团菌病实验室诊断技术300

第十四章 痰液常规检查300

第一节 痰液采集与性状检验300

一、痰液采集300

二、性状检查300

第二节 显微镜检查301

一、痰液细菌涂片检查301

二、细胞学检查301

第十五章 军团菌尿抗原测定302

第一节 免疫层析法检测尿军团菌抗原302

一、基本原理302

二、试剂盒组成303

三、试验方法303

四、质量控制303

五、结果报告304

六、临床意义304

七、试验注意事项304

第二节 酶联免疫吸附试验检测军团军尿抗原305

一、工作原理305

二、试剂制备305

三、尿抗原ELISA检测程序306

第十六章 军团菌抗原和抗体测定309

第一节 直接免疫荧光法检测军团菌抗原309

一、基本原理309

二、荧光抗体制备309

三、试验方法310

四、结果判断310

第二节 间接免疫荧光法检测军团菌抗体310

一、基本原理310

二、细菌抗原制备310

三、羊抗人IgG、IgM荧光抗体制备311

四、试验方法311

五、临床意义311

第三节 酶联免疫吸附试验检测军团菌IgG、IgM抗体312

一、试验原理312

二、试剂组成和配制312

三、操作步骤314

四、结果判断314

五、临床意义314

第四节 军团菌抗体检测商售试剂盒的应用315

一、方法原理315

二、试剂组成315

三、标本要求316

四、试验前准备316

五、操作步骤316

六、结果判定317

七、诊断意义317

八、注意事项318

第五节 乳胶凝集试验快速鉴定嗜肺军团菌318

一、基本原理319

二、样本收集和准备319

三、试验方法319

四、注意事项320

五、试剂保存320

第六节 微量凝集试验测定嗜肺军团菌抗体320

一、抗原制备320

二、微量凝集试验321

三、诊断意义321

第十七章 军团菌分离培养与鉴定323

第一节 标本采集与运送323

一、临床标本采集323

二、环境水样采集323

三、标本运输324

第二节 标本处理原则和方法325

一、标本处理原则325

二、临床标本处理方法326

三、水样标本处理方法326

第三节 分离培养与初步鉴定327

一、军团菌选择性分离培养基327

二、接种328

三、孵育培养328

四、初步鉴定329

第四节 生化试验鉴定329

一、基本原理329

二、试验方法329

三、军团菌属生化试验特征333

四、利用碳源反应鉴定军团菌种338

第五节 细胞脂肪酸成分分析341

一、基本原理341

二、试验方法342

三、临床应用343

第六节 血清型鉴定349

一、军团菌家兔免疫血清制备349

二、乳胶凝集试剂的制备及其应用351

三、协同凝集试验试剂的制备及其应用353

第十八章 抗菌药物敏感性试验357

第一节 准则357

一、药敏试剂和方法标准化357

二、药敏试验质量控制和质量评价359

三、药敏试验报告规则与药敏折点判断359

第二节 抗菌药物敏感性试验方法360

一、基本原理360

二、试验方法360

三、军团菌药敏试验现状364

第十九章 分子生物学技术在军团菌病诊断中应用369

第一节 分子生物学技术研究现状369

一、探针杂交技术的发展概况369

二、聚合酶链反应技术的发展概况370

三、基因测序分型研究现状371

第二节 分子生物学技术在军团菌检测中应用373

一、探针杂交技术在军团菌快速检测中应用373

二、PCR在军团菌病快速诊断中应用374

三、基因测序在军团菌病诊断中应用375

第二十章 核酸杂交技术在军团菌病诊断中应用378

第一节 地高辛标记探针检测嗜肺军团菌378

一、基本原理378

二、DNA探针的设计与标记378

三、靶DNA制备379

四、DNA结合于硝酸纤维膜上379

五、探针与靶DNA杂交379

六、杂交结果检测380

七、结果判定380

八、临床应用380

第二节 反向斑点杂交检测嗜肺军团菌381

一、基本原理381

二、PCR引物和探针的设计381

三、DNA提取382

四、DNA的生物素标记382

五、PCR扩增及DNA探针的纯化382

六、反向杂交与结果判断382

七、PCR-微孔板反向杂交382

八、临床应用383

第三节 聚合酶链反应结合探针杂交检测军团菌384

一、基本原理384

二、引物设计和合成385

三、DNA提取385

四、探针标记385

五、PCR扩增386

六、扩增产物的杂交检测386

七、临床应用388

第四节 荧光原位杂交在军团菌检测中应用389

一、基本原理389

二、试验方法390

三、临床应用393

第二十一章 聚合酶链反应（PCR）在军团菌检测中应用396

第一节 概述396

一、随机扩增多态性DNA技术（RAPD）396

二、扩增片段长度多态性技术（AFLP）397

三、脉冲场凝胶电泳（PFGE）398

四、聚合酶链反应—直接测序分型（PCR—SBT）398

第二节 常规PCR在军团菌病诊断中应用399

一、基本原理399

二、标本采集、运送与处理400

三、试验菌株400

四、PCR试验401

五、临床应用403

第三节 PCR酶切分型检测军团菌和嗜肺军团菌403

一、基本原理403

二、引物设计404

三、试验菌株404

四、主要试剂和仪器406

五、基因组DNA提取406

六、PCR扩增406

七、酶切试验406

八、特异性试验406

九、结果判断406

十、临床应用408

第四节 巢式PCR酶切分型检测军团菌和嗜肺军团菌409

一、基本原理409

二、引物设计410

三、标本采集与处理410

四、DNA提取410

五、PCR程序410

六、快速酶切分型411

七、特异性和敏感性411

八、临床应用412

第五节 扩增片段长度多态性分型检测嗜肺军团菌413

一、基本原理413

二、嗜肺军团菌AFLP分型试验方法414

三、临床应用416

第六节 实时荧光PCR检测军团菌和嗜肺军团菌418

一、基本原理418

二、引物和探针设计418

三、试验方法421

四、临床实际应用423

第七节 荧光共振能量转移PCR检测嗜肺军团菌425

一、基本原理426

二、试验方法426

三、临床实际应用427

第八节 嗜肺军团菌毒力岛基因组PCR分型鉴定430

一、毒力岛和毒力基因及其致病性430

二、试验方法431

三、临床实际应用433

第九节 基因测序在军团菌分型鉴定中应用435

一、嗜肺军团菌SBT基因测序分型435

二、军团菌属基因测序分型438

三、多位点（MLSA）测序分型439

第二十二章 培养基和常用试剂配制443

第一节 培养基制备一般准则443

一、培养基制备基本要求443

二、质量控制444

第二节 军团菌常用培养基和生化反应试剂444

一、军团菌选择性培养基444

二、生化试验培养基447

三、非军团菌选择性培养基449

四、军团菌运送培养基450

五、军团菌痰消化液（0.1%DTT）451

第三节 常用试剂和染色液制备451

一、酸缓冲液451

二、磷酸盐缓冲液（PBS）452

三、ELISA常用溶液配制452

四、探针杂交试剂的配制452

五、革兰染色法453

六、复红染色454

七、鞭毛染色法454

八、不完全福氏佐剂配制454

九、麦氏标准比浊管455

十、离心力换算456

附录 军团菌常用缩略语和名词中英文对照458