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实验课要求及实验室安全规则1

第一篇 生物分子的定性定量测定方法2

1 滴定分析法2

1．1 酸碱滴定法的原理和操作2

1．2 氧化还原滴定法的原理和操作3

2 紫外—可见分光光度法4

2．1 原理4

2．2 紫外—可见分光光度计5

2．3 吸光度的测定和浓度计算5

3 荧光分光光度法6

3．1 原理6

3．2 荧光分光光度计6

3．3 荧光强度的测定和浓度计算7

4 电化学检测法7

4．1 原理7

4．2 电化学检测仪8

4．3 电流值的测定和浓度计算8

5 其他测定方法8

6 实验部分8

实验一 总糖和还原糖含量的测定8

实验二 葡萄糖传感器检测样品中葡萄糖含量11

实验三 玉米种子中色氨酸含量的测定13

实验四 蛋白质的定量分析15

Ⅰ．总氮量的测定——微量凯氏定氮法15

Ⅱ．Folin—酚试剂法（Lowry法）17

Ⅲ．考马斯亮蓝染色法（Bradford法）19

Ⅳ．双缩脲法20

Ⅴ．紫外吸收法22

实验五 核酸的定量分析23

Ⅰ．紫外分光光度法测定核酸含量23

Ⅱ．利用糖类的颜色反应测定核酸含量24

Ⅲ．定磷法测定核酸含量（钼蓝比色法）26

实验六 维生素被B2（核黄素）的荧光测定法28

实验七 食物中维生素C的提取和含量测定30

实验八 植物材料中总黄酮的提纯与鉴定32

第二篇 生物大分子的性质研究34

7 糖类的理化性质34

7．1 物理性质34

7．2 单糖的氧化反应34

7．3 单糖的强酸脱水和颜色反应35

7．4 多糖的水解35

8 脂质的理化性质36

8．1 物理性质36

8．2 甘油三酯的水解和皂化36

8．3 不饱和脂肪酸的化学性质36

8．4 羟基脂肪酸的酰基化37

9 蛋白质的理化性质37

9．1 胶体性质37

9．2 两性解离和等电点38

9．3 沉淀作用38

9．4 变性作用39

9．5 颜色反应39

9．6 紫外吸收性质40

10 核酸的理化性质40

10．1 物理性质40

10．2 紫外吸收性质40

10．3 显色反应41

10．4 变性和复性41

11 实验部分42

实验九 糖类的呈色反应42

实验十 脂肪碘值的测定44

实验十一 氨基酸和蛋白质的呈色反应46

实验十二 蛋白质的两性反应和等电点的测定48

实验十三 蛋白质的沉淀和变性反应49

第三篇 酶促反应动力学和酶活力测定52

12 酶的概论52

12．1 酶的概念和分类52

12．2 酶的催化特点52

12．3 生物工程常用酶制剂简介53

13 酶促反应动力学54

13．1 底物浓度对酶促反应速率的影响54

13．2 温度对酶促反应速率的影响55

13．3 pH对酶促反应速率的影响56

13．4 激活剂对酶促反应速率的影响56

13．5 抑制剂对酶促反应速率的影响56

14 酶活力测定57

14．1 酶活力单位的定义和酶活力的概念58

14．2 酶活力测定方法的类型和特点59

15 实验部分59

实验十四 酶作用的专一性59

实验十五 酶的激活和抑制61

实验十六 底物浓度对酶活性的影响——蔗糖酶米氏常数的测定62

实验十七 过氧化物酶动力学性质分析65

实验十八 大麦萌发前后淀粉酶活力的比较66

实验十九 糖化型淀粉酶活力的测定68

实验二十 发色底物测定大曲中70

α-葡萄糖苷酶活力70

实验二十一 蛋白酶活力的测定72

第四篇 生物分子的分离技术75

16 生物分离的一般过程和特点75

17 生物样品的预处理76

17．1 固液分离76

17．2 细胞的破碎76

17．3 生物分子的提取技术77

18 生物分子的粗分级77

18．1 浓缩技术77

18．2 沉淀技术78

18．3 膜分离技术79

19 生物分子的细分级80

19．1 层析技术80

19．2 电泳技术81

19．3 离心分离技术83

20 实验部分83

实验二十二 酵母RNA的提取及其组分的鉴定83

实验二十三 核苷酸的DEAE-纤维素薄板层析法85

实验二十四 氨基酸纸层析及蛋清氨基酸成分研究86

实验二十五 蛋白酶的盐析沉淀89

实验二十六 醋酸纤维薄膜电泳分离蛋白质91

实验二十七 凝胶过滤层析测定蛋白质的相对分子质量93

实验二十八 SDS-聚丙烯酰胺凝95

胶电泳（SDS—PAGE）法测定蛋白质的相对分子质量95

实验二十九 DNA的琼脂糖凝胶电泳99

第五篇 物质代谢过程研究102

21 物质代谢概论102

21．1 代谢的概念和含义102

21．2 代谢途径和代谢中间产物102

21．3 代谢的催化剂和调节位点103

22 物质代谢的研究方法103

22．1 测量气体法103

22．2 代谢物化学分析法104

22．3 同位素示踪法104

22．4 添加酶的抑制剂104

22．5 代谢工程方法105

23 实验设计和数据统计方法106

24 实验部分107

实验三十 葡萄糖代谢中间产物的定性分析107

实验三十一 碘乙酸抑制糖酵解110

实验三十二 发酵过程中无机磷的利用和ATP的生成112

实验三十三 脂肪转化为糖类的定性实验114

实验三十四 脂肪酸的β-氧化作用115

实验三十五 植物组织的转氨基作用118

实验三十六 瓦勃氏呼吸仪法研究氨基酸的脱羧作用120

实验三十七 设计正交实验比较几种因素对酵母发酵作用的影响125

第六篇 综合性、设计性和研究型实验129

实验三十八 酵母蔗糖酶粗提取、纯化及其酶性质研究129

实验三十九 固定化酵母细胞水解蔗糖135

实验四十 马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验137

实验四十一 用不同分离技术提取柠檬酸的工艺比较研究140

实验四十二 蛋白酶抑制剂的筛选和制备144

参考文献147