图书介绍

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分子生物学与蛋白质化学实验方法
  • (美)布伦达 D.斯潘格勒著;茹炳根 韩铁钢 茹强译 著
  • 出版社: 北京:化学工业出版社
  • ISBN:7502580921
  • 出版时间:2006
  • 标注页数:178页
  • 文件大小:7MB
  • 文件页数:190页
  • 主题词:分子生物学-化学实验;蛋白质-化学实验

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图书目录

目录1

引言和背景1

第一部分 分子生物学9

实验一11

微量移液器使用指南11

实验二17

质粒DNA模板的制备17

(2)PCR扩增质粒DNA的LTB基因24

(1)测定质粒DNA浓度24

实验三24

实验四36

(1)琼脂糖凝胶电泳36

(2)PCR产物回收36

实验五43

(1)限制性内切酶酶切LTB插入基因和载体43

(2)平板制备43

(2)酶切后插入基因片段和载体的回收50

(1)琼脂糖凝胶电泳法纯化酶切后的插入基因片段和载体50

实验六50

实验七56

(1)DNA浓度测定56

(2)插入基因与载体的连接56

实验八63

重组体转化宿主细胞63

(3)接种培养物/PCR反应/分离质粒70

(2)用可能的重组子划线平板70

(1)挑取菌落,PCR检测插入片段70

实验九70

实验十75

(1)琼脂糖凝胶电泳检测插入基因75

(2)用质粒少量制备试剂盒纯化pET28LTB75

实验十一80

(1)DNA浓度检测80

(2)乙醇沉淀质粒DNA80

(3)测序反应80

(2)测序凝胶示范87

实验十二87

(1)纯化延伸反应产物87

实验十三91

(1)分析序列数据91

(2)验证插入序列91

实验十四98

(1)基因表达98

(2)表达宿主的转化98

诱导LTB基因表达:测定最大表达的时间104

实验十五104

第二部分 蛋白质化学109

实验十六111

(1)SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析诱导时间过程111

(2)用Western blot将蛋白质转移至膜上111

实验十七120

Western Blot的显像120

实验十八125

大规模培养物的制备125

亲和层析法分离LTB130

实验十九130

实验二十134

(1)柱层析分段物的SDS-PAGE鉴定134

(2)免疫印迹检验LTB的存在134

实验二十一140

蛋白质浓缩和结晶140

实验二十二147

准备ELISA微量滴定板来分析系列神经苷脂配体147

实验二十三153

用ELISA分析系列神经节苷脂配体153

实验二十四161

蛋白质结构测定:X射线衍射技术161

实验二十五168

用X射线衍射分析蛋白质晶体的特征(可任选)168

实验二十六169

引物设计169

索引173

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