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第一部分 生物化学实验技术基础1

第1章 生物化学实验须知1

1.1生物化学实验的目的1

1.2生化实验室实验规则1

1.3生化实验室安全及防护知识2

1.3.1实验室安全知识2

1.3.2实验室急救3

1.4实验误差与数据处理4

1.4.1系统误差4

1.4.2偶然误差4

1.4.3操作错误5

1.4.4数据处理5

1.5实验报告6

第2章 分光光度技术7

2.1分光光度技术原理7

2.1.1光谱7

2.1.2光吸收定律8

2.2分光光度计的构造10

2.2.1光源10

2.2.2单色光器10

2.2.3比色皿12

2.2.4检测器12

2.3 7220型分光光度计13

2.3.1仪器外部结构及各部分名称和功能13

2.3.2仪器使用方法15

2.3.3注意事项15

2.4分光光度技术在生化试验技术中的应用16

第3章 离心技术17

3.1离心技术的基本原理17

3.2离心机的类型和主要构造18

3.2.1离心机的类型18

3.2.2离心机的主要构造19

3.3离心方法的选择21

3.3.1差速离心21

3.3.2密度梯度离心21

3.4离心条件的确定22

3.4.1离心力22

3.4.2离心时间22

3.4.3温度23

3.4.4 pH值23

第4章 色谱技术24

4.1色谱技术原理24

4.2色谱的基本概念24

4.2.1固定相与流动相24

4.2.2分配系数与迁移率24

4.2.3分离度（分辨率）25

4.2.4交换容量（或操作容量）26

4.2.5正相色谱与反相色谱26

4.3色谱技术的分类26

4.3.1按流动相-固定相分类26

4.3.2按实验方法分类27

4.3.3按分离的机制分类27

4.4常用的几种色谱技术28

4.4.1纸色谱28

4.4.2薄层色谱30

4.4.3离子交换色谱32

4.4.4凝胶色谱35

4.4.5高效液相色谱41

4.4.6气相色谱49

4.4.7亲和色谱51

第5章 电泳技术60

5.1电泳的基本原理60

5.1.1电荷的来源60

5.1.2泳动度60

5.1.3影响电泳的主要因素61

5.2电泳的分类62

5.2.1按分离原理分类62

5.2.2按分离目的分类63

5.2.3按用途分类63

5.3常用的电泳技术63

5.3.1纸电泳63

5.3.2醋酸纤维薄膜电泳65

5.3.3琼脂糖凝胶电泳66

5.3.4聚丙烯酰胺凝胶电泳67

5.3.5毛细管电泳72

5.3.6免疫电泳技术73

5.3.7等电聚焦电泳74

5.3.8双向凝胶电泳77

第二部分 生物化学实验79

第6章 生物化学基础实验79

实验1 糖的颜色反应和还原性鉴定79

Ⅰ.莫氏（Molisch）反应鉴定糖79

Ⅱ.塞氏（Seliwanoff）反应鉴定酮糖81

Ⅲ.杜氏（Tollen）反应鉴定戊糖82

Ⅳ.糖的还原性鉴定82

实验2植物组织中可溶性糖含量测定——蒽酮比色法84

实验3还原糖和总糖的测定——3，5-二硝基水杨酸法87

实验4血糖的定量测定90

Ⅰ.邻甲苯胺法测定血糖含量90

Ⅱ.葡萄糖氧化酶法测定血糖含量（GOD-PAP法）92

实验5淀粉的提取、性质和含量测定93

实验6肝糖原的提取和鉴定96

实验7粗脂肪的含量测定——索氏抽提法97

实验8油脂的化学性质99

Ⅰ.油脂皂化值的测定99

Ⅱ.油脂酸值的测定101

Ⅲ.油脂碘值的测定101

实验9卵磷脂的提取及鉴定104

实验10血清总胆固醇的定量测定105

Ⅰ.磷硫铁法测定血清胆固醇106

Ⅱ.Abell法测定血清胆固醇107

Ⅲ.胆固醇氧化酶法测定血清胆固醇108

实验11蛋白质的颜色反应和沉淀作用110

Ⅰ.蛋白质的颜色反应110

Ⅱ.蛋白质的沉淀反应113

实验12蛋白质浓度测定（微量凯氏定氮法）115

实验13蛋白质含量测定——紫外吸收法117

实验14蛋白质的含量测定（二）——双缩脲法、考马斯亮蓝结合法、BCA法119

Ⅰ.双缩脲法测定蛋白质浓度119

Ⅱ.考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度121

Ⅲ.BCA法测定蛋白质含量122

实验15非蛋白氮（NPN）的测定124

实验16 DNP、DNS-氨基酸的制备和鉴定126

实验17肽的序列分析——PTH法130

实验18醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白132

实验19 SDS-聚丙烯酰胺电泳法测定蛋白质的相对分子质量134

实验20血清白蛋白的分离与纯化138

实验21葡聚糖凝胶柱色谱分离纯化蛋白质140

实验22火箭免疫电泳143

实验23核酸的含量测定144

实验24 DNA琼脂糖凝胶电泳147

实验25动物肝脏中DNA的提取与紫外检测148

实验26 CTAB法提取植物基因组DNA150

实验27酵母RNA的提取与鉴定152

实验28质粒DNA的提取153

实验29肝脏中谷丙转氨酶的活力测定155

实验30过氧化氢酶米氏常数的测定157

实验31测定多种因素对唾液淀粉酶活力的影响159

实验32猪血中超氧化物歧化酶（SOD）的提取及活力测定161

实验33多酚氧化酶的制备和化学性质163

实验34维生素A的定性测定164

实验35维生素B1的定性测定165

实验36维生素C的定量测定（磷钼酸法）167

第7章 综合应用型实验170

实验37溶菌酶的提纯和活力测定170

实验38芦荟多糖的制备和含量测定172

实验39发酵过程中的无机磷和ATP检测174

实验40胰岛素和肾上腺素对血糖浓度的影响176

实验41叶绿体色素的提取、分离和含量测定178

实验42用正交法测定几种因素对牛胰蛋白水解酶活力的影响180

实验43 DNA聚合酶链式反应及产物鉴定（PCR）184

实验44气相色谱法检测果蔬中有机氯类和拟除虫菊酯类农药186

实验45质粒DNA的提取、酶切及鉴定189

实验46汉防己中生物碱的提取、分离和鉴定192

第8章 设计性实验195

实验47果皮废弃物中果胶的制备195

实验48茶叶中茶多酚物质的提取与含量测定196

实验49蛋白质的表达、分离、纯化和鉴定197

附录198

附录1常用缓冲液的配制198

附录2硫酸铵饱和度常用表203

附录3常见蛋白质相对分子质量参考值（单位：Da）204

附录4色谱法常用数据及性质205

附录5各类物质常用的薄层显色剂208

附录6凝胶染料的种类及特点209

参考文献210