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第一章 载体1

第一节 对载体的要求1

第二节 无机载体材料1

一、硅胶2

二、可控孔玻璃3

三、其他5

第三节 天然有机高聚物6

一、纤维素6

二、琼脂糖凝胶7

三、葡聚糖凝胶8

四、脂质体9

五、用于膨胀床技术的载体材料9

六、微生物表面呈现9

七、其他10

第四节 合成有机高聚物10

一、丙烯酰胺衍生物10

（一）聚丙烯酰胺凝胶10

（二）Trisacryl11

（三）聚丙烯酰胺-琼脂糖凝胶12

（四）吖内酯颗粒13

二、甲基丙烯酸衍生物14

（一）聚甲基丙烯酸羟乙酯14

（二）TSK Toyopearl凝胶14

（三）Eupergit14

三、聚苯乙烯类17

（一）聚苯乙烯板17

（二）灌注色谱填料18

四、聚四氟乙烯18

五、其他19

第五节 膜19

第六节 磁性微球19

（一）机械分散或喷珠法20

（二）有机单体聚合涂布于磁流体表面法20

（三）渗磁法21

（四）大分子稳定铁氧化物溶胶法21

（五）天然磁颗粒22

参考文献22

第二章 活化方法25

第一节 概述25

第二节 实验程序26

一、活化氨基的方法26

（一）溴化氰法26

（二）N-羟基琥珀酰亚胺酯活化法29

（三）羰基二咪唑活化法34

（四）还原氨化法37

（五）FMP活化法44

（六）碳二亚胺法45

（七）有机磺酰氯法49

（八）二乙烯基砜法51

（九）吖内酯法53

（十）氰尿酰氯57

二、巯基活化方法60

（一）碘乙酰和溴乙酰活化方法60

（二）马来酰亚胺法61

（三）吡啶二硫化物64

（四）二乙烯基砜66

（五）环氧法67

（六）TNB-硫醇活化法67

三、羰基活化法69

（一）酰肼活化法69

（二）还原氨化72

四、羟基活化方法74

（一）环氧化物（二环氧乙烷）活化方法74

（二）二乙烯基砜76

（三）氰尿酰氯76

五、活泼氢的活化76

（一）偶氨反应76

（二）曼尼期缩合法80

六、光交联反应84

参考文献86

第三章 生物分子的固定化89

第一节 “手臂”89

一、3.3＇-二氨丙基亚胺90

二、1,6-二氨基已烷92

三、6-氨基已酸93

四、乙二胺94

（一）EDA与固定化6-AC反应94

（二）EDA通过转氨基反应对聚丙烯酰胺凝胶进行衍生化95

五、戊二醛95

六、氨化环氧化物96

七、酸酐96

八、对β-硫酸酯乙砜基苯胺97

九、氨基酸98

十、封闭98

第二节 小分子配基的固定化99

一、糖类99

（一）蜜二糖99

（二）乳糖100

（三）甘露糖102

（四）肝素102

二、酶抑制剂103

（一）对氨基苯甲脒103

（二）抑胃肽A104

（三）赖氨酸105

三、生物素及类似物105

四、染料107

（一）Cibacron Blue F3GA107

（二）酚红和百里酚蓝108

五、金属离子螯合剂109

（一）亚氨基二乙酸110

（二）三羧甲基乙二胺110

六、疏水性配基111

（一）辛胺112

（二）苄胺112

七、药物112

（一）氨甲蝶呤112

（二）阿普洛尔114

（三）17β-雌二醇114

（四）四氢大麻酚118

（五）乙炔基甾体119

八、巯基还原剂119

（一）N-乙酰高半胱氨酸120

（二）二氢硫辛酰胺120

九、组氨酸121

十、硼酸衍生物121

第三节 蛋白质的固定化121

一、鸡卵粘蛋白121

二、亲和素、链亲和素及亲和素亚基121

（一）CNBr活化法固定亲和素或链亲和素122

（二）单亚基（单价）亲和素的制备123

三、凝集素123

（一）ConA 固定于CNBr活化的Sepharose 4B124

（二）ConA固定于戊二醛活化的磁性微球124

四、细胞因子124

第四节 固定化酶125

一、5＇-磷酸二酯酶126

二、TPCK-胰蛋白酶126

三、胃蛋白酶127

四、木瓜蛋白酶127

五、金黄色葡萄球菌V8蛋白酶128

六、β-D-半乳糖苷酶128

七、电化学聚合高分子固定法128

第五节 肽类抗原、抗体及免疫球蛋白结合蛋白的固定化129

一、肽类抗原129

（一）通过氨基或羧基进行肽的偶联130

（二）通过巯基进行偶联131

（三）通过活性氢偶联肽131

二、抗体132

（一）抗志贺氏菌抗血清直接偶联于醛基磁性微球135

（二）EDC法偶联甲状腺素（T4）抗体135

（三）抗体定位固定135

（四）抗体偶联于聚苯乙烯上137

（五）抗体与脂质体偶联140

（六）基因工程单链抗体的固定化140

三、免疫球蛋白结合蛋白141

（一）蛋白A141

（二）蛋白G141

（三）蛋白A/G141

（四）蛋白B142

（五）Mannan结合蛋白142

第六节 核酸的固定化143

一、吸附于固相载体上143

二、化学偶联143

（一）重氮法偶联单链DNA143

（二）碳二亚胺偶联寡聚脱氧胸苷145

（三）过碘酸氧化法固定RNA146

三、亲和交联法147

第七节 诊断与治疗用药物的固定化147

第八节 细胞的固定化147

第九节 亲和交联法148

一、第二抗体-第一抗体系统148

二、蛋白A-抗体系统149

三、生物素-亲和素系统149

四、配位交联法149

五、其他亲和交联系统149

六、两个通过多重亲和交联与标记系统进行基因分离与分析的例子150

（一）固定化磁性核酸扩增检测150

（二）转基因动物基因组中特定基因的回收151

参考文献151

第四章 示踪技术155

第一节 活化程度和固定化配基密度的测定155

一、用茚三酮测量活化的程度155

二、用双辛可宁酸检测固定化的蛋白质157

三、用2.4.6-三硝基苯磺酸盐定量测试氨基、酰肼或者巯基158

四、用双辛可宁酸检测酰胺功能团159

五、对固定化亲合素或链亲和素上生物素结合位点的检验160

六、用考马斯亮蓝染料定量检测固定化蛋白质161

七、用不同的分析方法测量偶联的配基161

八、固定化配基的直接吸收扫描162

九、用埃尔梅试剂测量巯基基团163

第二节 亲和技术164

一、小柱的装填和使用165

二、大柱的装填与使用167

三、缓冲液和流速的考虑168

（一）结合缓冲溶液168

（二）非特异作用170

（三）洗脱方法171

（四）流速173

四、样品174

五、测量固定化配基的容易和活性175

（一）总结合容易的测量176

（二）比活性的测量177

参考文献177

第五章 固定化生物分子的应用178

第一节 亲和分离系统178

一、亲和色谱法178

（一）基本流程178

（二）配基的选择179

（三）亲和色谱方法179

（四）亲和色谱新进展182

（五）具体应用实例188

二、利用亲和吸附剂特异性地除去体系中的污染物质192

（一）去污剂192

（二）脂类与脂蛋白193

（三）内毒素194

（四）蛋白酶类195

（五）血液净化196

（六）其他197

三、细胞及其组分的亲和分离197

第二节 固相免疫分析199

一、基本概念与原理199

二、标记固相免疫分析的技术关键203

（一）抗体203

（二）抗体的固相比205

（三）标记208

（四）一些实用中的相关问题213

三、其他固相标记结合分析215

第三节 固定化酶固定化细胞与生物反应器215

一、在食品、制药等轻化工领域的应用216

二、临床治疗方面的应用220

三、化学分析方面的应用221

四、环境监测与治理221

五、生化基础研究221

（一）用固定化TPCK-胰蛋白酶水解胰岛素β-链222

（二）用固相胃蛋白酶水解IgG制备F（ab）2＇222

（三）用连续的固相酶柱进行DNA序列分析223

六、新能源的开发224

第四节 载体药物224

一、聚合物修饰225

二、凝胶包埋226

三、微球制剂226

四、脂质体227

五、导向药物228

第五节 载体试剂及生物大分子的固相合成229

一、固定化巯基还原剂229

（一）肽的还原229

（二）溶菌酶与核糖核酸A的还原229

二、生物大分子的固相合成230

三、多肽的固相序列分析231

第六节 生物传感器233

一、生物传感器的组成和工作原理233

二、生物传感器中配基固定化技术234

三、换能器235

四、生物传感器的发展和应用236

第七节 固定化生物分子的一些其他用途241

参考文献242

基本参考文献251