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第一篇 植物生理生化实验原理1

第一章 植物生理生化实验技术的一般原理1

1.1 植物材料的种类1

1.2 植物材料的采取1

1.3 分析样品的前处理和保存3

1.4 待测组分的提取、分离和纯化技术4

1.5 样品中待测组分的测定7

1.6 实验结果的数据处理与分析8

第二章 离心技术11

2.1 基本原理11

2.2 离心机的类型及主要构造12

2.3 常用离心技术15

2.4 分析性超速离心技术的应用17

第三章 层析技术20

3.1 层析原理20

3.2 分配层析22

3.3 吸附层析25

3.4 凝胶层析28

3.5 离子交换层析29

3.6 亲和层析31

3.7 高效液相色谱33

3.8 气相色谱34

3.9 层析技术的应用36

第四章 电泳技术40

4.1 电泳基本原理40

4.2 影响迁移率的主要因素42

4.3 凝胶电泳43

4.4 电泳的应用58

第五章 红外线C02气体分析技术61

5.1 红外线C02气体分析仪的工作原理61

5.2 红外线CO2气体分析仪的类型65

5.3 红外线CO2气体分析技术的运用68

第六章 光学分析技术70

6.1 紫外光和可见光分光光度法70

6.2 旋光分析法74

6.3 原子吸收分光光度法77

6.4 火焰光度法80

6.5 荧光分光光度法82

第七章 气体测压技术87

7.1 气体测压技术的类型及其基本原理87

7.2 气体测压技术的应用90

第八章 电化学分析技术95

8.1 电化学分析技术的类型及其基本原理95

8.2 电化学分析技术的应用98

8.3 DDS-12A型数字式电导率仪的基本原理及使用方法98

第九章 免疫化学技术——酶联免疫吸附测定法（ELISA）100

9.1 ELISA的原理101

9.2 设计和合成特定的免疫原101

9.3 抗体的制备102

9.4 标记抗原的制备103

9.5 ELISA测定程序的设计103

第二篇 植物生理生化实验技术105

实验技术105

实验1植物组织中自由水和束缚水含量的测定105

实验2植物组织水势的测定109

Ⅰ．小液流法109

Ⅱ．折光仪法111

Ⅲ．压力室法111

实验3植物细胞渗透势的测定（质壁分离法）114

实验4钾离子对气孔开度的影响116

实验5植物伤流液中糖和氨基酸的鉴定117

实验6植物根系活力的测定（TTC法）119

实验7植物组织中金属元素的测定（原子吸收分光光度法）121

实验8植物体内硝态氮含量的测定123

实验9植物体内硝酸还原酶活力的测定125

Ⅰ．离体法125

Ⅱ．活体法127

实验10用真空渗人法测定环境因子对光合作用的影响128

实验11 叶绿体色素的提取、分离和理化性质130

Ⅰ．提取与分离130

Ⅱ．理化性质132

实验12 叶绿素含量的测定134

实验13希尔反应的观察138

实验14核酮糖－1,5－二磷酸羧化酶活性的测定138

Ⅰ．分光光度法139

Ⅱ．同位素法141

实验15 乙醇酸氧化酶活性的测定142

实验16红外线C02气体分析仪法测定植物光合速率与呼吸速率144

Ⅰ．密闭系统斜率法144

Ⅱ．密闭系统落差法150

实验17氧电极法测定植物光合速率和呼吸速率151

实验18 叶绿体光诱导荧光强度的测定156

实验19 叶绿体中甘油醛－3－磷酸脱氢酶活性的测定157

实验20微量定容测压法测定种子的呼吸速率160

实验21小篮子法（广口瓶法）测定植物的呼吸速率162

实验22过氧化物酶活性的测定164

实验23过氧化氢酶活性的测定（高锰酸钾滴定法）165

实验24氮蓝四唑（NBT）法测定超氧物歧化酶（SOD）活力167

实验25淀粉酶活性的测定169

实验26脲酶Km值的测定172

实验27植物过氧化物酶同工酶的测定（凝胶圆盘电泳）175

实验28蛋白质相对分子质量的测定（SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳法）178

实验29植物组织中可溶性蛋白质含量的测定182

Ⅰ．斐林－酚试剂法182

Ⅱ．考马斯亮蓝G-250染色法184

Ⅲ．紫外吸收法185

实验30植物组织中总氮、蛋白氮含量的测定（微量凯氏法）186

实验31植物组织中游离氨基酸总量的测定（茚三酮溶液显色法）192

实验32植物组织中糖含量的测定194

Ⅰ．蒽酮比色法测定可溶性糖195

Ⅱ．3,5－二硝基水杨酸法测定还原糖197

Ⅲ．苯酚法测定可溶性糖199

Ⅳ．斐林试剂比色法测定还原糖201

实验33谷物淀粉含量的测定（旋光法）203

方法Ⅰ203

方法Ⅱ205

实验34植物种子生命力的快速测定207

Ⅰ．TTC法207

Ⅱ．染料染色法208

Ⅲ．碘化钾反应法209

Ⅳ．荧光法210

实验35植物组织中纤维素含量的测定211

实验36苯丙氨酸解氨酶（PALase）活性的测定213

实验37植物组织中DNA的提取与测定214

实验38 DNA的琼脂糖凝胶电泳217

实验39 RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳218

实验40植物组织ATP酶活性的测定220

实验41植物种子中主要不饱和脂肪酸的分离（反相纸层析法）223

实验42种子粗脂肪含量的测定225

实验43气相色谱法测定植物样品膜脂中脂肪酸的含量227

实验44气相色谱法测定乙烯含量229

实验45酶联免疫吸附检测法（ELHSA）测定植物激素含量231

实验46植物体内脱落酸、赤霉素的分离和测定234

实验47赤霉素对α－淀粉酶的诱导形成238

实验48植物激素对愈伤组织的形成和分化的影响239

实验49类似生长素对种子萌发的影响242

实验50植物春化和光周期现象的观察244

Ⅰ．植物春化现象的观察244

Ⅱ．植物光周期现象的观察245

实验51抗坏血酸（维生素C）含量的测定246

Ⅰ．滴定法246

Ⅱ．比色法248

实验52谷类作物种子中赖氨酸含量的测定250

Ⅰ．茚三酮显色法250

Ⅱ．染料结合法（DBL）252

实验53脯氨酸含量的测定258

实验54植物组织中丙二醛含量的测定260

实验55植物抗逆性的测定（电导仪法）261

附录264

附录1硫酸铵饱和度常用表264

附录2实验中常用酸、碱的比重和浓度的关系265

附录3常用固态酸、碱、盐的物质的量浓度配制参考表266

附录4常用酸、碱指示剂267

附录5常用缓冲溶液的配制267

附录6植物组织培养常用培养基272

附录7标准计量单位273

附录8常见的植物生长调节物质及其主要性质275

附录9植物激素与生长调节剂在农业生产中的应用276

主要参考文献279