图书介绍

基因工程实验指导【2025|PDF|Epub|mobi|kindle电子书版本百度云盘下载】

朱旭芬编著著
出版社：北京：高等教育出版社
ISBN：9787040284775
出版时间：2010
标注页数：335页
文件大小：109MB
文件页数：344页
主题词：基因－遗传工程－实验－高等学校－教材

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图书目录

实验计划表1

导论5

1 基因文库的构建25

1-1 染色体DNA的提取25

1-2 总RNA和mRNA的提取33

1-3 λ噬菌体DNA的提取40

1-4 染色体DNA的部分消化46

1-5 基因组文库的构建48

1-6 cDNA合成52

1-7 cDNA文库的构建58

2 目的基因的获得64

2-1 PCR扩增64

2-2 核酸电泳74

2-3 目的基因片段的获得81

2-4 核酸探针的标记及检测83

2-5 核酸探针筛选基因文库92

2-6 反转录PCR97

2-7 RACE PCR103

2-8 反向PCR110

2-9 Sitefinding-PCR114

3 载体质粒的制备119

3-1 质粒DNA的提取与纯化119

3-2 核酸纯度、浓度与相对分子质量的测定128

4 扩增质粒的构建133

4-1 限制性内切酶的酶切反应133

4-2 凝胶电泳法进行DNA的分离与纯化140

4-3 DNA片段的体外连接143

4-4 T-A克隆149

5 重组DNA导入宿主细胞153

5-1 感受态细胞的制备153

5-2 重组质粒的转化158

5-3 外源基因在毕赤酵母中的转化与整合163

6 重组子的筛选与鉴定169

6-1 阳性克隆的筛选169

6-2 DNA序列测定175

6-3 序列同源性分析181

6-4 DNA印迹183

6-5 菌落原位杂交193

6-6 荧光原位杂交196

7 表达质粒的构建与诱导表达201

7-1 表达质粒的构建与转化201

7-2 RNA印迹212

7-3 外源基因的诱导表达217

7-4 蛋白质浓度的测定222

7-5 SDS-PAGE227

7-6 蛋白质印迹236

8 蛋白质样品的分析243

8-1 等电聚焦电泳243

8-2 双向电泳246

8-3 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳257

8-4 酶联免疫吸附测定（ELISA）261

8-5 蛋白质生物功能测定263

8-6 酶活性的测定264

9 工程菌的培养与目的产物分离267

9-1 发酵条件的优化267

9-2 包含体的复性270

9-3 诱导表达蛋白质的分离沉淀274

9-4 凝胶过滤层析281

9-5 离子交换层析288

9-6 亲和层析295

附录1 简写303

附录2 实验注意事项307

附录3 如何撰写实验报告311

附录4 常用碱基、氨基酸符号及缓冲液313

附录5 大肠杆菌基因型316

附录6 培养基与试剂的配制318

附录7 实验仪器329

参考文献331