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第一篇 基因工程原理3

概论3

0.1分子生物学概述3

0.2基因工程概述4

0.3基因重组技术的应用前景5

第1章 分离目的基因和基因载体7

1.1目的基因的获取7

1.2基因载体的选择10

第2章 限制性内切核酸酶的应用15

2.1概念15

2.2序列特征16

2.3作用方式17

2.5影响酶切活性的主要因素18

2.4同裂酶和同尾酶18

第3章 目的基因和基因载体的体外连接19

3.1DNA连接酶19

3.2连接方式21

第4章 重组DNA转化宿主细胞24

4.1受体细胞的选择24

4.2重组基因的导入方法25

4.3转化细胞的扩增27

第5章 重组体阳性克隆的筛选28

5.1遗传检测法28

5.2物理检测法29

5.3菌落杂交筛选法30

5.4免疫化学检测法31

5.6PCR法确定重组体32

5.7DNA 序列分析32

5.5DNA-蛋白筛选法32

5.8真核宿主细胞的筛选标记33

第6章 外源基因表达及表达产物的检测34

6.1宿主细胞34

6.2表达载体34

6.3表达产物和表达水平35

6.4表达产物的检测38

6.5表达蛋白质的分离纯化39

第二篇 常用生化技术原理43

第1章 电泳技术43

1.1电泳基本原理43

1.2影响泳动度的主要因素43

1.3常用的电泳方法44

2.2层析原理54

2.1概述54

第2章 层析技术54

2.3柱层析法56

2.4凝胶过滤层析法58

2.5气相色谱和高效液相色谱61

第3章 分光光度技术66

3.1光学原理66

3.2 Lambert-Beer定律67

3.3分光光度计的基本构造68

3.4紫外可见光分光光度计69

3.5荧光分光光度计71

3.6酶标仪72

第4章 离心分析法76

4.1离心机基本原理76

4.3离心机的结构77

4.2离心机的分类77

4.4离心方法81

第5章 透析85

5.1透析膜（袋）85

5.2溶剂85

5.3物理条件86

第三篇 分子生物学常用技术89

第1章 目的基因和基因载体的分离89

实验1质粒DNA的提取89

实验2真核生物基因组DNA的提取94

实验3DNA的琼脂糖凝胶电泳96

实验4DNA的定量分析101

实验5PCR基因扩增102

实验6哺乳动物mRNA的纯化与鉴定106

实验7基因组DNA文库的建立111

第2章 酶切与连接117

实验1限制性内切核酸酶的酶切与鉴定117

实验2载体与目的基因的连接121

第3章 重组DNA的转化与筛选125

实验1重组质粒转化大肠杆菌及初步筛选125

实验2核酸探针的制备和标记126

实验3原位杂交法进行重组质粒的筛选129

实验4Northern杂交131

实验5真核细胞基因转染和筛选133

实验6转染细胞的筛选135

第4章 外源基因在宿主细胞中的表达138

实验1在大肠杆菌（E.coli）表达蛋白产物138

实验2变性聚丙烯酰胺凝胶电泳142

实验3蛋白质杂交法检测表达蛋白145

附：常用生物化学实验技术149

实验1不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳149

实验2凝胶过滤法测定蛋白质相对分子质量157

实验3透析实验161

实验4双缩脲反应162

实验5胰岛素及肾上腺素对血糖含量的影响163

实验6血糖含量测定164

实验7蛋白质定量测定165

第四篇 分子生物学实验室基本操作和数据169

第1章 分子生物学实验室常规仪器设备169

1.1实验室的常规仪器及设施169

1.2离心机室的装备173

1.3分析仪器室的设置174

1.4核素实验室181

1.5细胞培养室184

1.6暗室187

1.7冷室187

第2章 实验室基本操作188

2.1玻璃仪器的洗涤188

2.2搅拌和振荡188

2.3容量玻璃仪器的使用方法189

2.4分光光度计的使用190

2.5干燥箱和恒温箱192

2.6电热恒温水浴193

2.7酸度计193

第3章 实验室常用数据196

第4章 常用载体图谱204

主要参考文献230