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绪论1

第一节 病原微生物与食品安全1

一、病原微生物污染现状1

二、现代食品微生物检测技术在食品安全中的重要作用2

第二节 现代食品微生物检测的研究内容2

一、食源性病原菌免疫学快速检测技术2

二、食源性病原菌分子生物学快速检测技术3

三、基于培养基生理生化特征的检测技术4

四、食源性病原菌的自动化检测技术4

五、食源性致病菌生物传感器检测技术5

第三节 现代食品微生物检测技术的发展趋势及应用5

一、现代食品微生物检测技术的发展趋势5

二、现代食品微生物检测技术的应用6

第一章　免疫荧光抗体技术检测食品微生物9

第一节 荧光发射的原理9

一、荧光9

二、免疫荧光显微技术10

第二节 荧光抗体的制备12

一、荧光色素12

二、其他荧光物质14

第三节 荧光抗体的标记与纯化14

一、荧光抗体的标记方法14

二、标记抗体的纯化14

第四节 荧光抗体的质量鉴定16

一、染色特异性和敏感性的测定16

二、F/P比值的测定17

三、抗体工作浓度的确定17

第五节 免疫荧光抗体的染色技术17

一、标本制作17

二、荧光抗体染色方法17

三、荧光抗原染色法19

第六节 免疫荧光抗体技术在食品微生物检测中的应用19

一、试验器材及试剂20

二、操作步骤20

三、评定标准20

四、报告21

参考文献21

第二章　酶联免疫技术检测食品微生物22

第一节 酶联免疫测定的基本原理与常用的酶及其底物22

一、基本原理22

二、常用的酶及其底物22

第二节 酶标记物的制备24

一、戊二醛法24

二、过碘酸钠法25

三、酶标记物工作浓度的确定26

四、酶标记物的保存26

第三节 酶联免疫吸附测定技术26

一、基本原理26

二、ELISA的种类27

三、固相载体30

四、ELISA的测定方法31

第四节 其他类型的ELISA32

一、斑点ELISA32

二、BAS-ELISA33

三、免疫印迹法33

四、发光酶免疫测定33

第五节 酶联免疫测定技术在食品微生物检测中的应用34

一、细菌及其毒素的检测34

二、真菌及其毒素的检测35

三、病毒的检测36

四、寄生虫的检测36

五、应用实例37

参考文献37

第三章　放射免疫分析测定技术检测食品微生物39

第一节 放射免疫分析基本原理39

一、基本原理39

二、常用的放射性同位素47

三、放射免疫技术基本类型48

第二节 同位素标记物的制备49

一、直接标记法49

二、间接标记法52

三、同位素标记物的纯化53

四、同位素标记物的鉴定58

第三节 固相放射免疫测定技术61

一、SPRIA的种类62

二、固相载体62

三、SPRIA的测定方法65

四、放射免疫分析在食品微生物检测中的应用66

参考文献66

第四章　单克隆抗体技术检测食品微生物67

第一节 单克隆抗体技术的基本原理67

一、抗原的概述67

二、抗体的概述67

三、单克隆抗体技术68

第二节 单克隆抗体制备的基本技术70

一、免疫动物72

二、制备融合细胞76

三、细胞融合78

四、抗体检测80

五、杂交瘤细胞的克隆化81

六、单克隆抗体的制备和冻存82

七、克隆抗体的纯化85

第三节 单克隆抗体在食品微生物检测中的应用86

一、检测致病菌及其毒素86

二、应用实例90

三、注意事项91

参考文献91

第五章　免疫金技术在食品微生物检测中的应用92

第一节 基本原理92

一、血清学诞生与免疫标记技术的出现92

二、免疫金技术的产生及特点92

三、免疫金技术的原理93

四、免疫金技术的应用类型93

第二节 免疫胶体金的制备95

一、胶体金的制备95

二、免疫金的制备97

第三节 免疫金测定技术101

一、斑点金免疫渗滤测定101

二、斑点金免疫层析测定103

第四节 免疫金银染色104

一、原理104

二、染色方法105

第五节 免疫金技术在食品微生物检测中的应用105

一、检测致病菌及其毒素106

二、应用实例106

参考文献107

第六章　核酸探针技术检测食品微生物108

第一节 核酸探针技术基本原理108

第二节 核酸探针的标记方法109

一、核酸探针的同位素标记109

二、核酸探针的生物素标记110

三、核酸探针的地高辛标记111

四、核酸探针的光敏DNP标记111

五、核酸探针的三硝基苯磺酸（TNBS）标记111

六、核酸探针的辣根过氧化物酶标记111

第三节 核酸探针的杂交方法112

一、菌落原位杂交112

二、斑点杂交112

三、印迹杂交113

第四节 分子信标114

一、分子信标基本原理115

二、分子信标的设计115

三、分子信标的应用116

第五节 核酸探针技术在食品微生物检测中的应用118

一、应用118

二、应用实例118

三、存在的问题及展望119

参考文献119

第七章　PCR技术检测食品微生物121

第一节　PCR反应的基本原理121

一、基本步骤122

二、PCR的基本特点122

三、PCR反应的应用124

四、PCR技术应用范围125

第二节　PCR反应体系125

一、引物125

二、Taq DNA聚合酶129

三、dNTP131

四、缓冲液131

五、模板132

第三节　PCR反应参数134

一、变性134

二、退火134

三、延伸135

四、PCR循环次数135

第四节　PCR扩增产物的鉴定136

一、琼脂糖凝胶电泳136

二、免疫检测141

三、Amplisensor分析141

第五节　PCR的种类142

一、多重PCR142

二、反转录PCR143

三、转录依赖的扩增系统145

四、再生式序列复制技术146

五、免疫PCR147

六、实时PCR148

第六节　PCR技术在食品微生物检测中的应用150

一、检测食品致病菌150

二、PCR技术检测食品致病菌的基本方法153

三、应用实例156

参考文献160

第八章　环介导等温扩增技术161

第一节 LAMP法的概述161

第二节 LAMP法引物的设计162

第三节 LAMP法的基本原理164

第四节 LAMP法的操作流程166

一、LAMP法的反应体系166

二、LAMP反应过程168

三、扩增产物的检测168

第五节 改良的LAMP反应169

参考文献170

第九章　基因芯片技术检测食品微生物172

第一节 基本原理173

第二节 引物和探针的设计174

一、PCR引物与探针的设计思路174

二、PCR引物的设计174

三、基因芯片探针的设计174

第三节 芯片制备175

一、载体175

二、点样法176

三、光刻DNA合成法178

第四节 基因芯片检测模板的扩增、标记与杂交检测179

一、样品DNA的扩增与荧光标记179

二、探针的标记179

三、基因芯片的杂交检测180

第五节 基因芯片的扫读181

一、激光系统扫读芯片181

二、CCD系统扫读芯片183

三、基因芯片数据分析183

第六节 芯片在食品微生物检测中的应用184

一、实验器材及材料187

二、实验方法187

参考文献191

第十章　食品微生物自动化仪器检测193

第一节 全自动微生物鉴定仪器193

一、ATB Expression细菌鉴定及药敏智能系统193

二、全自动微生物快速鉴定仪器VITEK系统197

第二节 全自动微生物总数快速测定仪器198

一、微生物总数快速测定仪199

二、ISO—GRID检测系统200

第三节 全自动大肠杆菌快速测定仪器200

一、肠杆菌快速测定仪200

二、大肠杆菌荧光法现场快速定量检测系统201

第四节 其他快速测定仪器201

一、自动菌落计数系统201

二、应用电阻抗技术的全自动微生物监测系统——BACTOMETER203

三、全自动酶联荧光免疫分析系统——mini VIDAS206

四、API—细菌鉴定系统207

第五节 自动化仪器检测食品微生物实例210

一、ATB细菌鉴定仪快速检测食物中毒样品中的麦氏弧菌210

二、荧光法快速检测肉制品中的大肠杆菌210

三、利用mini VIDAS快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素210

参考文献211

第十一章　生物传感器212

第一节 生物传感器的基本概念212

一、生物传感器的定义及基本组成212

二、生物传感器的分类和命名213

第二节 生物传感器的工作原理213

一、分子识别213

二、生化反应中量的变化和信号的转换214

三、生物放大214

第三节 常见的生物传感器原理及其应用215

一、酶生物传感器215

二、组织传感器216

三、微生物传感器216

四、免疫传感器216

五、DNA生物传感器217

第四节 生物传感器在微生物检测中的应用218

一、微生物的检测218

二、生物毒素的检测218

三、其他生物类毒素的检测219

四、应用实例219

第五节 发展前景220

参考文献221